HUV-EC-C人臍靜脈血管內皮細胞的處理方法
一、細胞簡介：
細胞名稱：HUV-EC-C[HUVEC](人臍靜脈血管內皮細胞)(STR鑒定正確)
別稱HUV-EC-C;HUVEC
背景描述：HUV-EC-C[HUVEC]細胞可用于血管內皮修復損傷的研究。
組織來源：臍靜脈/血管內皮
生長特性：貼壁細胞
細胞形態：上皮細胞樣
生物安全等級 1
生長培養基 Ham'sF-12K＋0.1mg/mlHeparin＋0.03-0.05mg/mlECGs＋10%FBS＋1%P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時間 ~23.5hours
凍存條件
凍存液：55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
致瘤性 No,thecellswerenottumorigenicinimmunosuppressedmice.Yes,thecellsdidformcoloniesinsemisolidmedium.
基因表達情況 factorVIII
二、人臍靜脈血管內皮細胞的培養步驟
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。棄培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入到凍存液中。
三、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。
3、輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4、按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培養液的新皿中或者瓶中。
四、人臍靜脈血管內皮細胞收到后的處理方法
細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，加入6ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松）
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