干貨 | 為什么別人的切片染色做的那么好看？切片染色技巧分享
石蠟切片
1．取材
（1）取材要快，時間久了組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等會發(fā)生變化。
（2）取材時盡可能減少對取材組織塊的損傷。
2．固定
（1）固定液現(xiàn)用現(xiàn)配，有的混合固定液之間會發(fā)生氧化還原作用，配置時間過早會失去固定效果。配好后放至陰涼處，避免陽光直射。
（2）固定液用量必須充足（多數(shù)為組織塊的20~30倍），水分多的組織塊中間應(yīng)更換1-2次新液。
（3）固定完畢后，保存于嚴(yán)密緊塞或加蓋的容器里，同時在容器內(nèi)外做好標(biāo)記。
（4）不同的組織有不同的固定液，例如眼球有專門的眼球固定液。固定液會影響后續(xù)的切片染色。
3.脫水
（1）脫水必須在有蓋的玻璃瓶中進行。
（2）更換高濃度的脫水劑時，最好不要移動組織塊。
（3）每級停留時間不宜太長，嚴(yán)格控制脫水時間。
（4）如果脫水組織塊需要過夜，可將組織塊停留在70%濃度的乙醇溶液中。
（5）脫水必須徹底，否則不易透明。
4．透明
（1）使用透明劑時，要隨時蓋緊蓋子，以免空氣中的水分進入。
（2）更換每級透明劑動作要快速，避免吸收濕氣。
（3）在透明過程中， 如果材料周圍出現(xiàn)白色霧狀，說明材料中的水未被脫凈，應(yīng)重新脫水，然后再透明。
5．透蠟
（1）盡量保持在較低溫度中進行，以石蠟不凝固為度；
（2）透蠟溫度要恒定，不可忽高忽低；
（3）操作要迅速，盡量在最短的時間內(nèi)完成石蠟透入過程，以免引起組織變硬、變脆、收縮等。
6.切片
（1）在每次操作切片刀和標(biāo)本，或更換標(biāo)本前一定要鎖定手輪，并用護刀罩將刀刃遮住。
（2）將基體上的刀架盡可能靠近標(biāo)本,調(diào)整標(biāo)本的表面位置，使之與刀刃盡可能平行。
（3）在切片時，勻速轉(zhuǎn)動手輪。當(dāng)切到比較硬的標(biāo)本時，放慢手輪轉(zhuǎn)動速度。
（4）在操作切片刀和標(biāo)本前，或調(diào)換標(biāo)本和切片刀前，或是在休息時，應(yīng)鎖定手輪，用護刀罩蓋住刀片邊緣！
冰凍切片
1. 包埋劑用量要適宜，過多過少都會影響組織的冷凍質(zhì)量。
2. 現(xiàn)將少量膠擠在托架上預(yù)冷凍，約30秒鐘左右，膠水凝固再放置組織。放置時在組織周圍再加一些膠去冷凍。
3. 冷凍的溫度要根據(jù)不同的組織調(diào)整，溫度過低過高都會對組織塊的后續(xù)切片產(chǎn)生影響。
4. 載玻片室溫存放即可，不需要冷凍存放。
5. 切片時保持刀片鋒利。當(dāng)發(fā)現(xiàn)切片質(zhì)量開始下降，建議更換刀片。同時選用最舒服、放縱的姿勢，有利于控制雙手。
6. 可以使用刷子幫助取下切片。
7. 切片時持續(xù)均勻地轉(zhuǎn)動切片機，比切一片停一下切出來的效果更好。
染色多種多樣，借助于機器染色的效果會更好一些。下面總結(jié)幾種常見的染色步驟
HE染色步驟
1. 切片入二甲*苯I脫蠟 5 min
2. 二甲*苯II脫蠟 5 min
3. 二甲*苯III脫蠟 5 min
4. 無水乙醇I 1 min
5. 無水乙醇II 1 min
6. 95%乙醇 1min
7. 85%乙醇 1min
8. 自來水沖洗 1min
9. 蘇*木*精染液 5~10min
10. 自來水沖洗 適度
11. 1%鹽酸酒精分化 數(shù)秒
12. 自來水沖洗 適度
13. 伊紅染液 1~3min
14. 自來水沖洗 適度
15. 95%乙醇I 10s
16. 95%乙醇II 10s
17. 無水乙醇I 30s
18. 無水乙醇II 30s
19. 無水乙醇III 1min
20. 二甲*苯透明I 1min
21. 二甲*苯透明II 1min
22. 二甲*苯透明III 1min
23. 樹脂封片
天狼星紅染色
1. 石蠟切片脫蠟至水
2. 天狼星紅染液1h
3. 流水沖洗數(shù)秒
4. 0.5%醋酸分化30 s
5. 無水乙醇 30 s *3
6. 二甲*苯1 min*3
PAS染色
1. 石蠟切片脫蠟至水
2. 過*碘*酸氧化20 min；蒸餾水3 min
3. Schiff染液40 min；蒸餾水1 min
4. 蘇*木*素5 min；蒸餾水2 min
5. 鹽酸酒精1s；蒸餾水2 min
6. 藍(lán)化液 5 s
7. 無水乙醇 30 s
8. 二甲*苯3 min
MASSON染色
1. 石蠟切片脫蠟至水
2. 蘇*木*素 5 min；鹽酸酒精10 s
3. 藍(lán)化液 10 s；蒸餾水2 min
4. 麗春紅5 min；0.2%冰*醋*酸1 min
5. 1%磷鉬酸1min；苯胺藍(lán) 1 min
6. 0.2%冰*醋*酸1min
7. 無水乙醇 30 s
8. 二甲*苯3 min
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