GB 31657.5-2025 蜂產品中4種抗病毒類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法

蜂產品作為全球重要的天然食品，其安全性直接關系到消費者健康。然而，抗病毒類藥物在蜜蜂養殖中的違規使用，導致蜂蜜、蜂王漿等蜂產品中藥物殘留問題日益突出。為應對這一挑戰，我國于2025年正式實施《GB 31657.5-2025 食品安全國家標準 蜂產品中4種抗病毒類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》（以下簡稱“GB 31657.5-2025”），該標準通過創新檢測技術，實現了對蜂產品中金剛烷胺、金剛乙胺、美金剛和嗎啉胍等4種抗病毒藥物的高靈敏度、高準確性檢測，為蜂產品質量安全提供了堅實保障。

一、標準背景：破解蜂產品藥物殘留檢測難題
1. 抗病毒藥物殘留的潛在風險
抗病毒類藥物（如金剛烷胺）曾被用于防治蜜蜂病毒性疾病，但其殘留可能通過食物鏈進入人體，引發過敏反應、耐藥性增強等健康風險。例如，歐盟自2013年起明確禁止金剛烷胺在蜂產品中的使用，我國農業農村部也將其列入《食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單》。然而，由于蜂產品基質復雜（含高糖、高黏度成分），傳統檢測方法易受干擾，導致假陽性或漏檢問題頻發。
2. 技術升級的迫切需求
此前，蜂產品中抗病毒藥物殘留檢測多采用液相色譜法或氣相色譜-質譜法，但存在靈敏度不足、抗干擾能力弱等缺陷。例如，某研究顯示，傳統方法對蜂王漿中金剛烷胺的檢出限僅為5μg/kg，難以滿足歐盟0.1μg/kg的限量要求。GB 31657.5-2025的出臺，標志著我國蜂產品檢測技術從“定性篩查”向“精準定量”的跨越。

二、標準核心：液相色譜-串聯質譜法的創新應用
GB 31657.5-2025以液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）為核心技術，通過優化前處理、色譜分離和質譜檢測等環節，實現了對4種抗病毒藥物的高效分離與精準定量。
1. 前處理技術：凈化與富集的雙重突破
提取方法：針對蜂蜜和蜂王漿的不同特性，標準分別采用“80%乙腈溶液提取+苯硼酸固相萃取柱凈化”和“乙腈提取+增強型脂質去除凈化包（EMR）凈化”兩種方案。例如，蜂王漿中高含量的蛋白質和脂質易干擾檢測，EMR凈化包通過選擇性吸附脂質，可去除90%以上的基質干擾，顯著提高回收率。
內標法定量：引入金剛烷胺-d15、金剛乙胺-d4等同位素內標，有效校正基質效應和儀器波動。實驗數據顯示，使用內標法后，蜂王漿中嗎啉胍的回收率從70%提升至95%，批內相對標準偏差（RSD）從15%降至5%。
2. 色譜分離：極性修飾反相柱的精準匹配
標準選用“可耐受100%水相的極性修飾烷基反相色譜柱（100×2.1mm，2.7μm）”，通過優化流動相（0.1%甲酸溶液-甲醇梯度洗脫）和柱溫（30℃），實現了4種抗病毒藥物在8分鐘內的完全分離。例如，金剛烷胺與金剛乙胺的保留時間差異從傳統方法的0.5分鐘延長至1.2分鐘，峰形對稱性顯著改善，避免了峰重疊導致的定量誤差。
3. 質譜檢測：多反應監測（MRM）模式的高靈敏度捕獲
采用電噴霧正離子模式（ESI+）和MRM掃描方式，針對每種藥物選擇2對特征離子對（1對定量、1對定性），并通過優化碰撞能量（如金剛烷胺的定量離子對152.2>135.2，碰撞能量23eV），將檢測靈敏度提升至0.1μg/kg級別。例如，在蜂蜜基質中，金剛烷胺的檢出限（LOD）為0.3μg/kg，定量限（LOQ）為1μg/kg，滿足歐盟和我國最新限量要求。

三、標準實施：從實驗室到產業的全鏈條升級
1. 檢測流程的標準化與可操作性
GB 31657.5-2025詳細規定了從樣品采集、前處理到儀器分析的全流程操作步驟，并附有典型色譜圖和質譜參數表，為檢測人員提供了“傻瓜式”操作指南。例如，標準明確要求：蜂蜜樣品需在密閉條件下于60℃水浴解晶，避免高溫導致藥物降解；蜂王漿樣品需使用預活化的EMR凈化包，并嚴格控制振蕩時間（3分鐘）和離心轉速（8000r/min），以確保凈化效果一致性。
2. 方法驗證：科學性與可靠性的雙重保障
通過大量實驗驗證，標準證明了其方法的準確性、精密度和耐用性：準確度：在蜂蜜和蜂王漿中添加1-50μg/kg濃度的標準溶液，回收率范圍分別為70%-110%和70%-120%，符合國際標準要求；精密度：批內RSD≤15%，批間RSD≤20%，滿足日常檢測需求；耐用性：通過改變流動相比例（±5%）、柱溫（±2℃）等參數，檢測結果波動均小于10%，表明方法對儀器條件變化的耐受性強。
3. 產業應用：從出口監管到國內市場治理
該標準的實施，為蜂產品行業提供了統一的技術語言，助力企業突破國際貿易壁壘。例如，某大型蜂產品出口企業采用GB 31657.5-2025方法后，其蜂蜜產品中抗病毒藥物殘留的檢測合格率從92%提升至99%，成功打入歐盟市場。同時，國內市場監管部門也將其納入年度抽檢計劃，2025年國抽中蜂產品抗病毒藥物殘留的不合格率較上年下降60%，有效規范了養殖環節用藥行為。

四、未來展望：技術迭代與標準升級
盡管GB 31657.5-2025在技術層面實現了重大突破，但蜂產品安全仍面臨新挑戰。例如，新型抗病毒藥物（如RNA干擾制劑）的研發可能帶來新的殘留風險，而現有標準尚未覆蓋。未來，檢測技術將向“高通量、多組分、智能化”方向發展：高通量檢測：通過開發多通道固相萃取裝置和快速色譜柱，實現單次檢測20種以上藥物殘留；智能化分析：結合人工智能算法，自動識別基質效應和干擾峰，提升檢測效率；標準動態更新：建立標準物質庫和檢測方法數據庫，根據新發現的風險物質實時更新標準內容。

結語
GB 31657.5-2025的出臺，標志著我國蜂產品安全檢測技術邁入國際先進行列。通過液相色譜-串聯質譜法的創新應用，該標準不僅解決了抗病毒藥物殘留檢測的“卡脖子”問題，更為全球蜂產品質量控制提供了“中國方案”。未來，隨著技術的持續迭代和標準的不斷完善，我國蜂產品行業必將實現從“規模擴張”到“質量引領”的跨越式發展，為消費者提供更安全、更優質的天然食品。