過氧化氫酶和過氧化物酶的作用
一、實驗目的
1.了解過氧化氫酶的作用，掌握常用的測定過氧化氫酶的方法。
2.了解過氧化物酶的作用，掌握常用的測定過氧化物酶的方法。
二、實驗原理
氧化物酶是植物體內普通存在的、活性較高的一種酶。它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關系，在植物生長發育過程中，它的活性不斷發生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時期植物體內代謝的變化在過氧化物酶催化下，H 2 O 2 將愈創木酚氧化成茶褐色產物。此產物在470nm 處有最大光吸收，故可通過測470nm 下的吸光度變化測定過氧化物酶的活性(愈創木酚法)。
過氧化氫酶普遍存在于植物的所有組織中，其活性與植物的代謝強度及抗寒、抗病能力有一定關系。過氧化氫酶屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫則既是氧化劑又是還原劑。
因此，可根據H 2 O 2 的消耗量或02的生成量測定該酶活力大小。
在反應系統中加入一定量(反應過量)的過氧化氫溶液，經酶促反應后，用標準高錳酸鉀溶液(在酸性條件下)滴定多余的過氧化氫，即可求出消耗的H 2 O 2 的量。
三、 儀器 、原料和試劑
(一) 測定過氧化氫酶
儀器 722型分光光度計，離心機，研缽，容量瓶，試管，吸管
原料
馬鈴薯塊莖。
試劑
1. 0.05mol/LpH 5.5的磷酸緩沖液；
2. 0.05mol/L 愈創木酚溶液；
3. 2％H 2 O 2 ；
4. 20％三氯乙酸。
（二）過氧化物酶活性的測定
儀器
研缽，三角瓶，酸式滴定管，恒溫水浴鍋，容量瓶；
原料
小麥葉片
試劑
1. 10％H 2 SO 4
2. 0.2mol/LpH7.8磷酸緩沖液
3. 0.1mol/L 高錳酸鉀標準液：稱取KMnO 4 3.1605g，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成1000mL，再用0.1mol/L 草酸溶液標定。
4. 0.1mol/LH 2 O 2 ： 市售30％H202大約等于17.6mol/L，取30％H 2 O 2 溶掖5.68mL，稀釋至l000mL，用標準0.1mol/LKMnO 4 溶液(在酸性條件下)進行標定。
5. 0.1mol/L 草酸：稱取優級純H 2 C 2 O 4 ·2K 2 O12.607g 用蒸餾水溶解后，定容至1000mL。
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