脂類染色
一、脂類概述
脂類物質在人體中占有相當大的部分,通常它們在人體內以兩種形式存在,第一種為脂肪,主要為中性脂肪,儲存的部位如皮下,大網膜,肌間腎周圍組織等部位,另外一種為結構脂肪,如磷脂,膽固醇等它們與蛋白,糖類結合在一起存在于細胞內,構成細胞的組成成分。
1、單純脂質:由脂肪酸各醇化合的酯,如中性脂肪,油及蠟等,蘇丹染料可染為黑色或紅色。
2、復合物質,脂肪酸的酯經水解后生成醇類,脂肪酸,磷酸和含氮的堿基等,復合脂質分為磷脂和糖脂。
①磷脂:卵磷脂,腦磷脂和神經鞘磷脂。蘇丹黑染色為陽性,PAS反應為陰性。
②糖脂,PAS反應呈陽性。
③衍生脂質:指尚具有脂質性質的單純脂質或復合脂的水產物,屬于這類的有脂肪酸和固醇類。
脂肪酸:硫酸耐爾藍陽性,PAS陰性。
膽固醇及其酯:Schultz試驗陽性。
組織化學的脂類物質:
1、中性物質,如甘油三酯,膽固醇及其酯,類固醇和某些糖酯。
2、酸性脂質,脂肪酸,磷脂。
二、蘇丹III IV聯合法(combined SudanIII IV method for lipids)
1、脂類組織的固定及固定液
脂類組織的固定特別要注意的問題,就是不要選擇含酒精的固定液,因為酒精可把脂類物質溶解,因此,用于脂類物質的首選固定液是甲醛,它可較好地保存脂類物質。
2、試劑的配制:蘇丹III0.2g,70%酒精50ml;蘇丹IV0.5g丙酮50ml。
3、操作步驟:
(1)用經過甲醛固定過的組織作冰凍切片,厚約10-15um,切完后放入蒸餾水中,染色前放入50%-70%酒精洗。
(2)入蘇丹III IV染液染5分鐘,
(3)70%酒精分化,
(4)水洗,
(5)蘇木素淺染細胞核,
(6)水洗,必要時分化,
(7)藍化,如為漂浮染色,此時應將切片附貼于載片,
(8)甘油明膠封固。
結果:脂類物質呈現橘紅色或鮮紅,核藍色。
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