可溶性糖含量的測定：蒽酮法
實驗?zāi)康?/span>
1.了解蒽酮法測定可溶性糖含量的原理
2.學習求標準曲線方程—最小二乘法
3.掌握分光光度計的使用
實驗原理
蒽酮比色定糖法是一個快速而方便的定糖方法，在強酸性條件下，蒽酮可以與游離的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（還原性和非還原性）作用生成藍綠色的糖醛衍生物，其顏色的深淺與糖的含量在一定范圍內(nèi)成正比。蒽酮也可以和其他一些糖類發(fā)生反應(yīng)，但顯現(xiàn)的顏色不同。當存在含有較多色氨酸的蛋白質(zhì)時，反應(yīng)不穩(wěn)定，呈現(xiàn)紅色。上述特定的糖類物質(zhì)，反應(yīng)較穩(wěn)定。
反應(yīng)式：
該法特點：靈敏度高，測定量少，快速方便。
實驗步驟
1． 求標準曲線方程
取6只試管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）標準溶液，沸騰7分鐘取出，用自來水冷至室溫，用721分光光度計比色，波長620nm，1＃管作為參比(保留)，求標準曲線方程。（G濃度為200μg／mL，蒽酮 試劑 ：2克蒽酮／每升85%H 2 SO 4 ）
2. 樣品含糖量的測定
（1）取菜葉（包菜和白菜兩個樣）準確稱取1.00克剪碎研細后，放入大試管，加入25mL蒸餾水，煮沸10分鐘，通過漏斗濾入250mL容量瓶中（可以抽濾），并用煮沸蒸餾水提取兩次，濾液并入容量瓶中，濾紙上的殘渣用水沖兩次，冷卻定容至刻度。
（2）吸取0.5mL濾液于編號的三只試管中，以蒸餾水補足1.00mL；另吸取1.00mL濾液于另編號的三只試管中，加蒽酮 試劑 5.0mL（于冷 水浴 中操作），搖勻后于沸 水浴 中煮沸7分鐘，取出冷卻至室溫，以求標準曲線的1＃管作為參比，用721 分光光度計 在620nm處測吸光度或透過率。
最小二乘法求標準曲線方程的公式：
X：G的濃度（μg／mL）Y：吸光度A＝－㏒T
本實驗要求相關(guān)系數(shù)r≥0.99
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