小鼠總抗氧化能力的測定
一、原理
機體中有許多抗氧化物質，能使Fe3 ＋ 還原成Fe2 ＋ ，后者可與菲啉類物質形成穩固的絡合物，通過比色可測出其抗氧化能力的高低。
二、目的
1．掌握總抗氧化能力的測定方法。
2．觀察血虛小鼠模型總抗氧化能力的變化。
3．觀察中藥對血虛小鼠模型總抗氧化能力的影響。
三、材料和方法
1．試劑：總抗氧化能力測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）
2．材料：EF管（1.5ml） 120 支，一次性試管（10ml）60支，移液器（P20ul、P100ul 、P1000ul）各2把及配套槍頭各200支，玻璃比色皿（3ml，1cm光徑）4只，溫浴箱，分光光度計，漩渦混勻器1臺，普通離心機大管、小管各1臺，試劑瓶（125ml）1個，燒杯（150ml）2個，吸管（10ml）2支，吸球1支，量筒（200ml）1個，標簽紙2張。
3．測定方法
（1）樣本處理：取全血3500轉/分離心15分鐘得血清待測。
（2）試劑盒組成及配制：（50T）
試劑一：液體60ml×2瓶，40 C保存。
試劑二：粉劑×2支，用時每支加雙蒸水至120ml，室溫保存。
試劑三：黃色貯備液10ml×1瓶，避光冷藏保存。貯備液得稀釋液60ml×1瓶。
試劑三應用液的配制：臨用前取貯備液以稀釋液稀釋，比例為 1 ： 19 。需多少配制多少。
試劑四：溶液24ml×1瓶
試劑五：溶液24ml×1瓶，室溫保存（天冷時會凝固，每次測試前適當加溫以加速溶解，直至透明方可使用）。——測組織中總抗氧化能力時用到，測血清時不用。
（3）操作 單位：ml
對照管 | 測定管 | |
試劑一 | 0.5 | 0.5 |
血清 | 0.1 | |
試劑二 | 1.0 | 1.0 |
試劑三應用液 | 0.25 | 0.25 |
漩渦混勻器充分混勻，370 C水浴30分鐘。
試劑四 | 0.05 | 0.05 |
蒸餾水 | 0.1 |
漩渦混勻器充分混勻，室溫放置10分鐘，蒸餾水調零，1cm 光徑 ，520nm處測各管吸光度。（370 C時，每分鐘每毫升血清使反應體系的吸光度（OD）值每增加0.01時，為一個總抗氧化能力單位）。
4）計算：
總抗氧化能力（單位/毫升血清）＝（測定管OD-對照管OD）÷0.01÷30×19
四、注意事項
1．室溫放置10分鐘后必須立即測定吸光度，否則吸光度會增加。
2．實驗試劑用量較少，所以加量一定要仔細、準確。
3．每次加樣后都必須在漩渦器上充分混勻。
4．難吸難打的試劑必須做到慢吸慢打。
五．思考題
1．小鼠血虛模型總抗氧化能力會出現什么樣的變化？為什么會出現這樣的變化？
2．怎樣用本實驗的結果解釋模型動物的某些主要癥狀？
北京天優福康生物科技有限公司
官網：http://www.jyzjsd.com/
服務熱線：400-860-6160
聯系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
