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分子生物學常用試劑的配制
發布日期:2022-09-01 09:12:26


分子生物學常用試劑的配制


1.LB(Luria-Bertani)培養液、平板的配制

配制每升LB培養液,應在950ml去離子水中加入:

細菌培養用酵母提取物(bacto-yeastextract)5g

細菌培養用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10g

NaCl10g

搖動容器直至溶質完全溶解,用5mol/LNaOH(約0.2ml)調節pH值至7.0,加入去離子水至總體積為1L,在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min。


L瓊脂平板的配制:


先按上述配方配制液體培養基,臨高壓滅菌前加入瓊脂糖15g/L,同法高壓蒸汽滅菌20min。從高壓滅菌器取出培養基時應輕輕旋動以使熔解的瓊脂糖能均勻分布于整個培養基溶液中,應使培養基降溫至50℃時,加入抗生素等不耐熱的物質。為避免產生氣泡,混勻培養基時應采取旋動的方式,然后可直接從燒瓶中傾出培養基鋪制平板。90mm直徑的培養皿約需30-50ml培養基,培養基完全凝結后,應倒置平皿并貯存于4℃備用。

2.瓊脂糖凝膠的配制

根據所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖,加入相應電泳緩沖液中,用微波爐
加熱煮沸至瓊脂糖完全溶解,加入適量E混勻,適當冷卻后傾入凝膠鑄槽中,插入梳子,凝膠厚度不超過梳孔,如有氣泡產生則用玻璃棒驅除,不能過早拔除梳子,應待凝膠完全凝結后才能拔除梳子。

3.P1、P2、P3的配制

P1的配制:在800ml去離子水中溶入Tri堿6.06g,Na2
EDTA 2H2O3.72g,用HCl調整H至8.0,用去離子水調整容積至1升,每升P1內加入RNaseA100mg。


P2的配制:在950ml去離子水中溶入aOH8.0g,20%SD50ml,調整容積至1升。


P3的配制:在500ml去離子水中溶入醋酸鉀294.5g,用冰醋酸調整H值至5.5,用去離子水調整容積至1升。

4.常用緩沖液:

TE
pH7.4
10mmol/LTris-HCl(pH7.4)
1mmol/LEDTA(pH8.0)

pH7.6
10mmol/LTris-HCl(pH7.6)
1mmol/LEDTA(pH8.0)

pH8.0
10mmol/LTris-HCl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)

STE(亦稱TEN)
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris-HCl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)

STET
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris-HCl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
5%TritoX-100

TNT
10mmol/LTris-HCl(pH8.0)
150mmol/LaCl
0.05%Twee20

電泳緩沖液

Tris-乙酸(TAE):50×濃貯存液(每升):242gTri堿


5. 7.1ml冰乙酸

100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

使用時再稀釋50倍。




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