HRP (辣根過氧化物酶) 標(biāo)記抗體流程
1. 8 mg 辣根過氧化物酶放入1 ml玻璃瓶,加入1 ml雙蒸水溶解,液體呈棕色。
2. 放入一個(gè)磁力攪拌子,電磁攪拌同時(shí)逐滴緩緩加入新配制的 NaIO4 0.2 ml,室溫下繼續(xù)攪拌40 min,液體呈現(xiàn)草綠色。
3. 將全部溶液用滴管裝入反復(fù)用去離子水沖洗的透析袋中,4 oC 對(duì)1 mM pH 4.4的NaAc透析過夜,中間換液3-4次,每次300 ml,溶液最終呈淺棕色。
4. 按照酶:抗體=1:1的比例準(zhǔn)備抗體,抗體濃度不小于2 mg/ml。
5. 對(duì)0.01 M Na2CO3透析過夜,中間換液3-4次。
6. 將透析好的HRP溶液(淺棕色)裝入玻璃瓶,加入0.2 M Na2CO3溶液將pH調(diào)整至9.0, 混勻后立即加入透析好的抗體,邊加邊用電磁攪拌器攪拌。
7. 用0.2 M Na2CO3溶液將HRP/抗體混合物的pH調(diào)整至9.0(9-10之間就可以),室溫繼續(xù)攪拌3hr。
8. 加入新配制的硼氫化鈉溶液100 ul,4 oC放置2 hr。
9. 4 oC,1×PBS中充分透析,每2hr換液一次,共換4 次。
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