瓊脂糖凝膠電泳回收PCR產物
一.原理
DNA片斷的分離與回收是基因工程 操作中的一項重要技術,例如可收集特定酶切片斷用于克隆或制備探針,回收PCR 產物用于再次鑒定等?;厥諏嶒炛袃蓚€最重要的技術指標是純度和回收率:前者未達標時會嚴重影響以后的酶切、連接、標記等酶參與的反應;后者不理想時往往會大大增加前期的工作量。
本實驗采用的是V-GENE公司的DNA凝膠回收試劑盒,其原理是:在凝膠融化液(BufferDE-A)中凝膠塊被迅速融化并釋放出DNA。加入高離液序列溶液(Buffer DE-B)后DNA片斷被選擇性吸附到silica膜上。經Buffer W1、Buffer W2洗滌去除殘留在silica膜上的雜質和高濃度鹽離子后,吸附到silica膜上的DNA片斷經微量水或Eluent洗脫下來,即可用于各種分子生物學實驗。
二.材料與方法
1 材料
PCR產物(未經純化)
2 儀器、用具
電泳儀、電泳槽、凝膠樣品梳、微波爐、臺式離心機、移液器、恒溫孵育器(55-65℃)、
1.5ml 離心管
3 試劑
1×TAE電泳緩沖液;溴化乙錠溶液(EB)
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