復(fù)制叉式復(fù)制
大腸桿菌等原核生物的環(huán)狀染色體 DNA 復(fù)制時,首先在 DNA 的復(fù)制起點上解螺旋。 DnaB 蛋白結(jié)合在復(fù)制起點處兩個解旋了的單鏈上,分別形成兩個前導(dǎo)鏈 (leading strand) 的引物 (primer) ,當前導(dǎo)鏈朝正反兩個方向同時延伸時, DnaB 蛋白朝延伸方向作逆向移動,陸續(xù)形成后隨鏈 (laggingstrand) 的引物。這是 DNA 雙向復(fù)制的方式。在復(fù)制啟動時,尚未解開螺旋的親代雙鏈 DNA 同新合成的兩條子代雙鏈 DNA 的交界處,就稱為復(fù)制叉 (replication fork) 。兩個靠得很近的復(fù)制叉之間形成的空間稱為“復(fù)制泡” (replication bubblo) 。真核生物線狀雙鏈 DNA 分子復(fù)制時也是先形成復(fù)制叉,只是復(fù)制起點不止一個。復(fù)制開始時, DNA 解旋酶把 DNA 雙鏈分子解開成兩股單鏈,形成了 Y 形的復(fù)制叉。復(fù)制叉是不對稱的,即一條子鏈是連續(xù)合成的,這是前導(dǎo)鏈,其合成稍稍領(lǐng)先于另一條不連續(xù)合成的后隨鏈。由于 DNA 子鏈的合成是從 5 ,端到 3 ’端方向進行的,所以前導(dǎo)鏈只需在復(fù)制起點上有一個引物,一旦形成復(fù)制叉后, DNA 聚合酶就可沿著親鏈模板不斷地加上新的核苷酸,從而合成一條新的連續(xù)的子鏈。同樣道理,由于 DNA 子鏈的合成是從 5 ,朝 3 ,方向進行,所以一定要等前導(dǎo)鏈開始合成而將后隨鏈的合成模板暴露出來以后,后隨鏈的合成才得以進行。此時,先由 DNA 引物酶合成與后隨鏈親鏈的堿基互補的、長約 10 個核苷酸的 RNA 引物,在 DNA 聚合酶作用下沿著后隨鏈模板合成 DNA ,一直延伸到前一個 DNA 片段 5 ’端上 RNA 引物為止。這樣合成的是一系列不連續(xù)的長約 200 個核苷酸的片段,這被稱為岡崎片段 (okazaki fragment) 。專一識別 DNA / RNA 雙鏈體中的 RNA 鏈的 DNA 修復(fù)酶,切除 RNA 引物,代之以由 DNA 聚合酶合成的 DNA 小片段。最后由 DNA 連接酶把岡崎片段連接成一條連續(xù)的 DNA 單鏈。
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