原代細胞培養(yǎng)過程中的常見問題

　　原代細胞與細胞系有什么區(qū)別?

　　根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織第一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的最大生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。

　　細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。

　　倍增和代數(shù)有什么區(qū)別?

　　倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

　　接收到的凍存細胞該如何處理?

　　收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快，以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

　　凍存的細胞該如何開始培養(yǎng)?

　　(1) 將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。

　　(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體完全融化。

　　(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。

　　(4) 用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。

　　(5) 打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正常現(xiàn)象)。

　　(6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。

　　(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。

　　(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃，5%CO2，95%空氣)

　　(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。

　　細胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基?

　　這取決于細胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

　　注意：凍存細胞復(fù)蘇后，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。

　　可以擴增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細胞嗎?

　　這取決于細胞的類型。一些細胞類型像神經(jīng)細胞，神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長緩慢的上皮細胞，不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質(zhì)細胞等等，可以擴增培養(yǎng)和再次凍存。

　　然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細胞生長性能的改變。

　　培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基?

　　我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。

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