常用酶的配制之蛋白水解酶類的配制
蛋白水解酶類的配置
| 貯存液 | 貯存溫度 | 反應濃度 | 反應緩沖液 | 溫度 | 預處理 | |
| 0.01mol/L Tris(pH7.8) | ||||||
| 鏈霉蛋白酶a | 20mg/ml | -20℃（溶于水） | 1mg/ml | 0.01mol/L EDTA | 37℃ | 自消化b |
| 0.5% SDS | ||||||
| 0.01mol/L Tris(pH7.8) | ||||||
| 蛋白酶Kc | 20mg/ml | -20℃（溶于水） | 50μg/ml | 0.005mol/L EDTA | 37～56℃ | 無須預處理 |
| 0.5% SDS | ||||||
a：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，經自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于10mmol./l Tris?HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml濃度，于37℃溫育1h。經消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中，保存-20℃。
c：蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中純化得到。該酶有兩個Ca2+結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理并無直接關系。然而，如果從該酶中除去Ca2+，由于出現遠程的結構變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質。所以，蛋白酶K消化過程中通常加入EDTA（以抑制依賴于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶K具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGT（pH8.0）至終濃度為2mmol/L,以鰲合Ca2+。
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