交互扣除RNA差別顯示技術（RSDD）

交互扣除ＲＮＡ差別顯示技術（RSDD）是由Kang等于1998年最新提出的結合扣除雜交和ＲＮＡ差別顯示兩項技術發展而出的一種有效、快速分離差別表達基因序列的方法。該方法應用于腫瘤進展的研究，可鑒定和克隆已知的和高比率(>65%)的未知序列，這包括分別作為增強和抑制表達進展功能的cDNAs，分別稱為增強進展基因（PEGen）和抑制進展基因（PSGen）。1999年通過交互扣除RNA差別顯示技術已鑒定出了16條差別表達的基因，其中有5條為未知的PEGen，6條為未知的PSGen。該方法主要由三部分組成：
交互扣除（reciprocal subtraction）：首先是要獲得兩個具有差別基因表達的細胞系的cDNA文庫，然后將這兩個文庫進行交互扣除雜交，從而獲得兩個扣除cDNA文庫。隨后通過體內剪切得到質粒cDNA文庫；
差異顯示（differentialdisplay）：由交互扣除cDNA文庫獲得的純化質粒可直接進行差異顯示，這包括PCR擴增(加入3種3′錨定引物和18種5′隨機引物)和進行5%序列膠電泳并切割回收差異顯示條帶；
表達分析（expression analysis）：運用反向Northern印跡分析（reverse Northern blotting）和Northern Blot分析鑒定經再擴增的DNA片段的差異表達。反向Northern Blotting是將經差異顯示得到的擴增后的DNA片段轉膜，并分別與來自兩個不同細胞系總RNA經反轉錄制備的32P標記的cDNA第一鏈探針(reverse transcribed 32P-cDNA prob)進行雜交。234條再次擴增的DNA片段中有181條被探測到(77%)，其差異表達顯示水平比兩種細胞間Northern blot分析要高1.8倍。最后經Northern blotting分析得到兩種細胞系差別表達的DNA片段被克隆到載體上進行測序分析。RSDD目前被證實對于有效且快速鑒定發生在復雜基因組以及細胞生理變化中差異表達的基因是很有價值的。

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