血糖的斐林法測定

一、實驗目的
掌握Folin-Wu法測定血糖含量的原理和方法。
二、實驗原理
1.血糖指的是血液中哪一種糖？
葡萄糖是血液主要的糖類，因此測血糖含量就是測血液中葡萄糖的含量。
2.用什么方法測定？
測定血液中葡萄糖的含量，即測復雜組分中一種物質的量，根據生化實驗基本技術的原理，可采用分光光度法（比色法）進行測定。
3.葡萄糖可以用比色法直接測定嗎？
不行，可以用間接的方法。血液中的葡萄糖與堿性硫酸銅溶液共熱，銅離子即被血液中的葡萄糖還原成氧化亞銅，后者又可使鉬酸試劑還原成低價的鉬藍（藍色）。血糖的含量與產生的氧化亞銅成正比，氧化亞銅的量與形成的鉬化合物的量成正比，可以用比色的方法進行測定。
三、材料、 儀器 與試劑
（一）、材料：動物血液
（二）、 儀器 （儀器的選擇在實驗開始前由學生在預習報告中提出方案后教師審定）
分光光度計、血糖管、奧氏吸管、水浴鍋、表面皿
（三）、藥品（ 試劑 的選擇在實驗開始前由學生在預習報告中提出方案后教師審定后并配制）
標準葡萄糖溶液、堿性硫酸銅溶液（A、B液）、酸性鉬酸鹽溶液、10％鎢酸鈉溶液、0.33mol/L硫酸溶液
四、實驗操作：
1.無蛋白血濾液的制備
用奧氏吸管吸取已加抗凝劑的全血1ml，緩緩放入20ml錐形瓶中，加水7ml，搖勻，血液變成紅色透明時加10％鎢酸鈉1ml， 搖勻，再加 0.33mol /L 硫酸，隨加隨搖，加完放置5～15min，至沉淀由鮮紅變為暗棕色，濾紙過濾。每毫升無蛋白血濾液相當于0.1ml全血。
2.血糖的測定
取具25ml刻度的血糖管3只，編號，用奧氏吸管吸取無蛋白血濾液2ml，放入第一只血糖管中，于第二只血糖管中加2ml標準葡萄糖溶液。第三只血糖管中加2ml蒸餾水。然后各加2ml新配置的堿性硫酸銅溶液，同時置沸 水浴 內煮6min，取出，在流水中迅速冷卻，各加入4ml酸性鉬酸鹽溶液，1min后以 蒸餾 水稀釋至25ml，混勻，倒入比色杯，用722型風光光度計于420～440nm波長比色（先以空白管調節零點，然后測標準管和樣品管）。
五、計算
按下式計算100ml全血中所含的血糖質量（mg）。
m＝ A ₁ C ₀
A ₀ /0.1 x100
式中：m：100ml血中所含的糖質量
C ₀ ：標準葡萄糖溶液濃度
A ₁ ：樣品溶液吸光度
A ₀ ：標準溶液吸光度
六、注意事項
1.欲得準確結果，所取血液的量必須準確。如果由 吸管 中放出血液的速度太快，會有大量血液粘在 吸管 內壁，容量不準，所以一般放出1ml血液所用的時間不應少于1min。
2.沉淀由鮮紅變為暗棕色，是因鎢酸鈉與硫酸作用生成鎢酸，在適當酸度時，使血紅蛋白變性、沉淀。如血沉淀放置后不變為棕紅色或重濾后仍混濁，可在鎢酸與血混合液中加入10％硫酸1～2滴，待變為暗棕色后再濾。

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