白細胞DNA的制備

        （1）采集外周靜脈血10ml，加1.7ml ACD（檸檬酸0.48g、檸檬酸鈉1.32g、葡萄糖1.47g、加水至100ml,0.6kg/cm2滅菌30min）抗凝。
　?。?）將血液放入已滅菌的50ml塑料離心管內，加30mlSTMT[0.32mol/L蔗糖、10mmol/l Tris-HCl(pH7.5)、5mmol/L MgCl2、1%Triton –X 100]，輕輕上下振蕩至透明，紅細胞完全溶解。
　?。?）冰浴10min，離心，3000rpm，10min。棄上清，STMT重復處理1～3次。
　?。?）棄上清，白色沉淀物加10ml STE[0.1mol/L NaCl、10mmol/l Tris-HCl(pH8.0)、1mmol/L EDTA(pH8.0)]，先少量，充分混勻，然后加10mg/ml蛋白酶K100μl，20%SDS30μl，搖勻，置37℃水浴15～20h。
　　（5）用等體積飽和酚抽提，3000rpm離心5min。
　?。?）用大口鈍緣吸管小心吸取上層水相，加飽和酚和氯仿-異戊醇（24：1）抽提，3000rpm離心5min 。
　?。?）小心吸取上層水相，用等體積氯仿-異戊醇（24：1），抽提，3000rpm離心5min。
　?。?）小心吸取上層水相，加入1/10體積3mol/l NaAc,2.5體積預冷無水乙醇混勻，-20℃過夜。
　?。?）將白色絮狀沉淀物用玻璃棒挑出，放入Eppendorf管內，加1ml 75%乙醇4℃靜置1h，離心，10000rpm 10min。
　?。?0）棄上清，用蠟膜將管口封好，針刺數個小孔，真空抽提（10～15min）。
　?。?1）加200μl 1×TE溶解，置4℃保存。
　?。?2）對所提DNA用紫外分光光度計進行定量和純度檢測。
　?。?3）取2～4μl DNA樣品，經瓊脂糖凝膠（Agarose）電泳，檢查所提DNA的質量及降解情況。

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