革蘭氏染色法(原理、方法和意義)

革蘭氏染色法

是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所發(fā)明，最初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關(guān)系。

未經(jīng)染色之細菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，而用以分類鑒定。

實驗原理

通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色。

而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

致病菌

如：金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌等 屬革蘭氏染色陽性菌。

百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等 屬革蘭氏陰性。

所以根據(jù)細菌的革蘭氏染色性質(zhì)，可以縮小鑒定范圍，有利于進一步分離鑒定，以對疾病做出診斷。又由于各種抗生素的抗菌譜不同，革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。

實驗方法

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：

1）涂片固定。

2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。

3）自來水沖洗。

4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。

5）水洗，用吸水紙吸去水分。

6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動進行脫色，20秒后水洗，吸去水分。

7）蕃紅梁色液（?。┤?分鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。

染色結(jié)果

革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。

臨床意義

其重要的臨床意義在于：

1、鑒別細菌

2、選擇藥物

3、與致病性有關(guān)：革蘭氏陽性菌能產(chǎn)生外毒素，革蘭氏陰性菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素，兩者的致病作用不同。

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