豬肺泡巨噬細胞的培養

1、細胞培養所用溶液及其配制

1×RPMI1640及：按照產品說明配制，過濾除菌，4℃保存備用。

新生牛血清：56℃滅活30min，-20℃保存備用。

2×104U/ml青、鏈霉素液（雙抗）：青鏈霉素各2×106 U溶于100ml滅菌雙蒸水中，過濾除菌，分裝，-20℃保存備用。

10×Na2EDTA-胰酶溶液（2.5%）：Na2EDTA 0.2g，NaCl 8.0g，KCl 0.2g ，Na2HPO4.12H2O 2.89g，KH2PO4 0.2g，1%酚紅溶液1.5ml，胰酶（1:250）2.5g，溶于100ml雙蒸水中，NaOH調節pH至7.2~7.5，過濾除菌，分裝，-20℃保存備用，使用時1∶10倍稀釋。

7.5%NaHCO3： 7.5g NaHCO3溶于100ml雙蒸水中，115℃高壓滅菌15min，置4℃冰箱冷藏備用。

10% RPMI1640營養液：于1×RPMI1640溶液中加入10%小牛血清，按照1% 比例加入2×104U/ml雙抗，用7.5% NaHCO3或10% HCl溶液調節pH值至7.2~7.4。

2、將50日齡的SPF仔豬放血，結扎氣管后無菌摘取其肺臟，先用0.9%的生理鹽水洗滌外表面，將pH7.2的PBS30.0ml從氣管灌入肺臟，輕輕拍打肺表面，1~2min后回收灌洗液，如此反復進行，直至灌洗液清亮為止。

將回收的支氣管肺泡灌洗液用吸管輕輕吹打，將細胞團塊打散，用單層無菌100目不銹鋼篩過濾，收集全部灌洗液，2000r/min離心10min，收集沉淀。洗滌兩次后加入適量含10%胎牛血清的1×RPMI1640營養液吹散細胞，置培養瓶或培養皿中于37?C CO2培養箱中培養，待其貼壁后棄去上清及非黏附細胞繼續用含10%胎牛血清的1×RPMI1640培養液培養備用。

北京天優福康生物科技有限公司

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