MTT的替代產品—XTT，WST-1，CCK-8（WST-8）

1 、 MTT 法
MTT ：化學名： 3- （ 4 ， 5- 二甲基噻唑 -2 ） -2 ， 5- 二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍。檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜（ Formazan ）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（ DMSO ）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯免疫檢測儀在 490nm 波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內， MTT 結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點： 由于 MTT 經還原所產生的甲臜產物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的準確性產生影響，而且溶解甲臜的有機溶劑對實驗者也有損害。
2 、 XTT 法
XTT ：化學名：

2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide ，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細胞還原成水溶性的橙黃色甲臜產物。當 XTT 與電子偶合劑（例如 PMS ）聯合應用時，其所產生的水溶性的甲臜產物的吸光度與活細胞的數量成正比。
優點： 1 、使用方便，省去了洗滌細胞； 2 、檢測快速； 3 、靈敏度高，甚至可以測定較低細胞密度； 4 、重復性優于 MTT 。
缺點： XTT 水溶液不穩定，需要低溫保存或現配現用。

3. WST-1

WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan(參考圖1)。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。

WST-1是MTT的一種升級替代產品，和MTT或其它MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點。首先，MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-1和XTT、MTS產生的formazan都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，WST-1產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加穩定，使實驗結果更加穩定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高
4 、 CCK-8 法或稱 WST-8 法

CCK-8 試劑中含有 WST–8 ：化學名： 2- （ 2- 甲氧基 -4- 硝基苯基） -3- （ 4- 硝基苯基） -5- （ 2 ， 4- 二磺酸苯） -2H- 四唑單鈉鹽，它在電子載體 1- 甲氧基 -5- 甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（ 1-Methoxy PMS ）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產物（ Formazan ）。生成的甲臜物的數量與活細胞的數量成正比。用酶聯免疫檢測儀在 450nm 波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等。

優點 ：

1 、使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；

2 、檢測快速；

3 、靈敏度高，甚至可以測定較低細胞密度；

4 、重復性優于 MTT ；

5 、對細胞毒性小；

6 、為 1 瓶溶液，毋需預制，即開即用。

缺點：

1 、與 MTT 相比， CCK-8 和 XTT 的價格比較貴。

2 、 CCK-8 試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養基顏色接近，不注意的話容易產生漏加或多加。

購買選擇：

l 如果對細胞增殖或細胞毒性的檢測要求不是很高，從經濟角度可以選擇 MTT ，可以滿足常規的細胞增殖或細胞毒性的檢測，主要缺點是形成的 formazan 水溶性很差，需要額外的步驟溶解 formazan 。

l 如果對細胞增殖或細胞毒性的檢測要求靈敏度非常高，并且希望非常便捷，在研究經費許可的條件下，建議選擇使用 Cell Counting Kit-8 。

l 如果既希望檢測靈敏度很高并且檢測比較便捷，但又希望價格不是太貴，建議選擇使用 WST-1 。