細(xì)胞浸潤生長性檢測實(shí)驗(yàn)

原理

浸潤性生長是細(xì)胞浸入或穿透其它組織增殖生長能力，浸潤生長性檢測是檢測癌性細(xì)胞的一項(xiàng)有意義的指標(biāo)。檢測方法需用其它正常組織和癌細(xì)胞共同培養(yǎng)，觀察癌細(xì)胞向正常組織浸潤生長的情況。

材料與儀器

雞胚
Bacto瓊脂 Eagle 緩沖液 小牛血清 福爾馬林 Hanks液 碘酒
玻璃圈 CO2溫箱 培養(yǎng)皿 平皿蓋 手術(shù)剪 手術(shù)鉗 離心機(jī) 注射器 燒杯

步驟

常用雞胚皮膚或心肌組織塊，作為被浸潤生長的對象；今以雞胚皮膚為例，培養(yǎng)過程如下

1.  程序

（1）雞胚浸出液制備

（2）瓊脂層制備

1 %Bacto瓊脂（用不含NaHCO3的Eagle緩沖液配）10 分

小牛血清 4 分

雞胚浸出液 4 分

（3）雞胚皮培養(yǎng)
無菌從10 天胚齡雞胚背部取皮，切成6～8mm3小塊；每皿中置2～3 塊，貼在瓊脂層表面；

（4）取內(nèi)徑6 mm，厚2 mm的無菌小磁杯或玻璃圈（硅橡膠圈亦可），套在雞皮小塊上；

（5）共培養(yǎng)
向每個(gè)小磁圈中加入25～30 ul 細(xì)胞懸液（含104個(gè)細(xì)胞的2 倍培養(yǎng)液），蓋上平皿蓋，置37 ℃CO2溫箱中培養(yǎng)；

（6）補(bǔ)液
次日再向每個(gè)環(huán)中補(bǔ)加2 倍培養(yǎng)液2.5 ul；

（7）切片觀察
第4 天挖取出雞皮塊，10%福爾馬林固定，常規(guī)包埋、切片、染色、光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞對雞胚皮膚浸潤的情況。

2.  結(jié)果
如癌性細(xì)胞已浸入雞胚皮膚內(nèi)，說明該細(xì)胞具有浸潤生長能力。

注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)避免細(xì)菌感染，如癌性細(xì)胞已浸入雞胚皮膚內(nèi)，說明該細(xì)胞具有浸潤生長能力。

常見問題

雞胚浸出液內(nèi)含有生長因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等，有刺激細(xì)胞生長作用，為早年培養(yǎng)使用的培養(yǎng)用液，現(xiàn)已被合成培養(yǎng)液所代替，但在某些研究中仍有一定應(yīng)用價(jià)值。
來源《組織培養(yǎng)和分子細(xì)胞學(xué)技術(shù)》