血清脂類測定方法
脂蛋白和脂質測定方法學評價血漿脂蛋白和脂質測定是臨床生化檢驗的常規測定項目，其臨床意義主要是：早期發現與診斷高脂蛋白血癥；協助診斷動脈粥樣硬化癥；評價動脈粥樣硬化疾患如冠心病和腦梗塞等危險度；監測評價飲食與藥物治療效果。
一、血漿脂蛋白測定
1、超速離心分離純化法超速離心法是根據血漿中各種脂蛋白的比重（密度）的差異，在強大離心力作用下進行分離純化的一種方法。
血漿在不同密度鹽溶液中經過超速離心，各種脂蛋白可按密度大小漂浮于不同鹽溶液介質中。脂蛋白漂浮的衡量單位是漂浮率(Sf)。
Gofman等于1950年確定，血漿脂蛋白在比重為1.063的NaCl溶液中（26℃），每秒每達因（ldyn=10-5N）克離心力的作用下的漂浮速度，稱為1個Svedbery單位（10-13s）。
Sf越大，脂蛋白密度越低。
一般操作方法是將血漿置于已準備好的不同密度梯度的鹽溶媒介質中，在強大離心作用下，各脂蛋白依其自身的Sf不同，分散于離心管中的密度梯度溶媒層，達到分離純化的目的。超速離心法是分離純化脂蛋白的有效技術，目前廣泛應用于脂蛋白、載脂蛋白代謝的研究中。
2、電泳分離法不同脂蛋白因蛋白質含量不同、其電荷量不同，故可用電泳方法進行分離，并根據血漿脂蛋白電泳遷移率不同予以判斷確認。電泳支持物一般常用醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙酰胺凝膠。
由于醋酸纖維薄膜要預處理，很繁雜，外加電泳時間過長，目前已很少使用。
臨床檢驗中主要采用瓊脂糖凝膠電泳進行分離，快而較為準確，儀器設備要求不高，被廣泛采用。聚丙烯酰胺凝膠作為支持物分離脂蛋白，值得推薦給臨床使用。
電泳分離法不論用何種支持物，血漿脂蛋白需用親脂染料如蘇丹黑B等進行預染再電泳，電泳完畢，脂蛋白根據電荷量不同，移動在不同的位置，再置于光密度計內進行掃描，計算出各種脂蛋白的百分比，該數值乘以血漿總脂量，即可求出α-脂蛋白、β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量，乳糜微粒停留在原點，無法測出其含量，正常空腹12h后，血漿中無CM存在。
也可將電泳畢的瓊脂糖凝膠脂蛋白區帶切割置于試管中，加水溶解，進行比色，測出各自百分比，這一手工半定量法無法測準，屬淘汰之列。
⒊沉淀分離法由于脂蛋白的組成及理化性質不同，在不同的聚陰離子和2價不同金屬離子（Mn2+、Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+）以及不同pH值條件下，使脂蛋白與聚陰離子結合形成復合物沉淀，以達到分離定量各種脂蛋白的目的。
如肝素錳沉淀血清中VLDL和LDL，離心沉淀，HDL則留在上清液，再定量HDL量，即為血漿HDL的量。
也可采用聚乙烯硫酸鹽沉淀LDL，離心去上清液留沉淀，再定量沉淀其中的LDL，即血漿的LDL量。
脂蛋白是一種既有蛋白質又有膽固醇，還有磷脂的復合體，如何定量，尚無一種較為理想的方法。
目前僅以測定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據，即測定HDL、LDL或VLDL中的膽固醇，并分別稱為高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）或極低密度脂蛋白-膽固醇（VLDL-C）。
這類測定方法是目前臨床廣泛使用的方法，快速并較為準確。⒋遮蔽直接測定法利用脂蛋白中某種特異抗體等物質，先將血漿中LDL和VLDL包裹保護，不受測定膽固醇試劑的影響，而直接測定未被包裹的HDL中的膽固醇，在不離心分離條件下，測定出HDL的膽固醇含量，快速準確，是近年來發展的新技術，值得推廣應用。
二、血清總脂質測定
血清總脂質主要包括FC、CE、PL和TG等。血清總膽質測定除作為脂質代謝紊亂及有關疾患的協助診斷外，還可用于血總脂增加的原發性膽汁酸肝硬化、腎病綜合征或急慢性肝炎以及血總脂減少的重癥肝炎、肝硬化等的嚴重肝實質性損害、惡液質、甲狀腺功能亢進和吸收不良綜合征等疾患的協助診斷。血總脂一般隨年齡增加而升高，40歲以上者顯著增加，65-70歲者反而降低。測定方法不同，正常參考值有一定的差異。測定方法分兩大類：一類是抽提法，將血清脂質通過脂質抽提劑提入某一介質中，再進行定量；另一類是直接測定法，即無需抽提。
1、脂質抽提法脂質存在于血清脂蛋白中，利用甲醇或乙醇使其與蛋白結合的脂質分離，再利用甲醇或乙醇的非極性有機溶媒使脂質溶于其中。Bloor溶劑（醚：醇為1：3，V/V）或FovCh溶劑（氯仿：甲醇為2：1，v/V）的醚氯仿等非極性溶劑的混合液，可提高切斷脂質與蛋白質的結合的能力，達到抽提的目的。血清脂質抽提入有機溶液后，蒸發干固，除去有機溶液，通過加熱氧化，再顯色定量。
2、脂質直接測定法如Sulfo-phospho-Vanillin法是加濃硫酸入血清加熱，冷卻后，加試劑顯色（即SPV反應）直接測定出血清總脂質。
三、膽固醇測定
血清中膽固醇包括CE和FC，酯型的CE占70％，游離型FC占30％。FC中的C3的-OH在LACT作用下，可分別與亞油酸（43％）、油酸（24％）、軟脂酸（10％）、亞麻油酸（6％）、花生四烯酸（6５）、硬脂酸（3％）等脂肪酸結合而成。血清中膽固醇在LDL中最多，其次是HDL和VLDL，CM最少。血清總膽固醇測定方法分為化學法和酶法兩大類。
⒈化學法化學法一般包括：
①抽提；
②皂化；
③毛地黃皂苷沉淀純化；
④顯色比色四個階段。代表性的方法有Sperry-Webb法，包括①到④步驟操作過程，常規操作中多省去了②、③。或者用省去②、③步驟的Zak-Henly法及省去③步驟的Abell-Kendall法，現將此法作為標準參考方法予以利用。
⒉酶法測定CE在膽固醇酯酶（cholesterolesterase,CHE）作用下水解成FC和FFA，FC再經膽固醇氧化酶（cholesteroloxidase，COD）氧化成△4膽甾烯酮和H2O2，再分別定量O2的消耗或者H2O2的生成量，或者△4膽甾烯酮生成量，以作為FC的定量依據。該法是目前常規應用方法，快速準確，標本用量少，便于自動生化分析器作批量測定。
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