熒光分光光度計法測定硫酸奎寧濃度的實驗方法與步驟
相關(guān)專題
熒光分析法具有靈敏度高、選擇性強、試樣量少的特點。本實驗的主要目的是通過學(xué)習(xí)熒光法測定硫酸奎寧，掌握VARIAN熒光分光光度計 的使用方法以及利用熒光法進(jìn)行定量分析。
一、實驗?zāi)康?/strong>
1.熟悉VARIAN熒光分光光度計 的原理和使用
2.掌握激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的概念及測定方法
3.掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行熒光定量分析
VARIAN熒光分光光度儀
熒光分光光度計 基本流程如圖：
光譜掃描的實現(xiàn):
儀器有兩套光柵分光系統(tǒng)，根據(jù)激發(fā)和發(fā)射光柵動的形式可形成兩種光譜：
激發(fā)光譜：激發(fā)光柵轉(zhuǎn)動
發(fā)射光譜：發(fā)射光柵轉(zhuǎn)動
熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜
固定發(fā)射光波長.以不同波長的入射光激發(fā)熒光物質(zhì),化合物發(fā)射的熒光強度F與入射光波長的關(guān)系曲線λ
2.發(fā)射光譜 (或熒光光譜 )
固定激發(fā)光波長. 化合物發(fā)射的熒光中各種波長組分的熒光強度.
二、實驗原理
1.硫酸奎寧的分子 結(jié)構(gòu)特征
硫酸奎寧屬生物堿類抗心率失常藥,其分子 具有喹啉環(huán)結(jié)構(gòu),可產(chǎn)生較強的熒光,可直接用熒光法測定其熒光強度,由校正曲線求出回歸方程進(jìn)而求出試樣中奎寧的濃度.
2.定量依據(jù)與方法
(1)定量依據(jù)：
在低濃度時,溶液的熒光強度與溶液中熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系
If = Kc
(2)定量方法:校正曲線法
標(biāo)準(zhǔn)曲線法：
配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測定熒光強度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測量未知試樣的熒光強度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度;
三、實驗內(nèi)容
?1.儀器和試劑:
儀器:熒光分光光度計,刻度吸管,容量瓶
試劑:0.1μg/ml硫酸奎寧(儀器室),
100μg/ml硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液,
硫酸奎寧待測液
0.05mol/l稀硫酸溶液
?2.實驗步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:
精密吸取硫酸奎寧標(biāo)液(100μg/ml,0.05 mol/L硫酸溶解)1.0、2.0、3.0、4.0及5.0ml分別置于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,制得對照品的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液,并計算濃度.
2.待測試樣溶液的制備:
吸取硫酸奎寧待測液1.0ml,于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,得待測試樣溶液.
3.測定:
(1)用0.1ug/ml的硫酸奎寧測定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜:
開機—打開光譜掃描工作站--方法建立—調(diào)零--激發(fā)光譜的測定—發(fā)射光譜的測定—打印結(jié)果
(2)校正曲線法測定試樣溶液的濃度:
打開濃度測定工作站--方法建立--校正曲線的測定--試樣溶液的測定—打印結(jié)果--關(guān)機
注意事項：溶液配制過程中需應(yīng)當(dāng)規(guī)范操作各種容量儀器，防止誤差；樣品測定時，應(yīng)該按照從低濃度到濃度的順序，盡可能的減少測量誤差；儀器校正后制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的參數(shù)應(yīng)該和測定樣品時保持一致
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