熒光分光光度計法測定硫酸奎寧濃度的實驗方法與步驟
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熒光分析法具有靈敏度高、選擇性強、試樣量少的特點。本實驗的主要目的是通過學習熒光法測定硫酸奎寧，掌握VARIAN熒光分光光度計 的使用方法以及利用熒光法進行定量分析。
一、實驗目的
1.熟悉VARIAN熒光分光光度計 的原理和使用
2.掌握激發光譜和發射光譜的概念及測定方法
3.掌握用標準曲線法進行熒光定量分析
VARIAN熒光分光光度儀
熒光分光光度計 基本流程如圖：
光譜掃描的實現:
儀器有兩套光柵分光系統，根據激發和發射光柵動的形式可形成兩種光譜：
激發光譜：激發光柵轉動
發射光譜：發射光柵轉動
熒光物質的激發光譜
固定發射光波長.以不同波長的入射光激發熒光物質,化合物發射的熒光強度F與入射光波長的關系曲線λ
2.發射光譜 (或熒光光譜 )
固定激發光波長. 化合物發射的熒光中各種波長組分的熒光強度.
二、實驗原理
1.硫酸奎寧的分子 結構特征
硫酸奎寧屬生物堿類抗心率失常藥,其分子 具有喹啉環結構,可產生較強的熒光,可直接用熒光法測定其熒光強度,由校正曲線求出回歸方程進而求出試樣中奎寧的濃度.
2.定量依據與方法
(1)定量依據：
在低濃度時,溶液的熒光強度與溶液中熒光物質的濃度呈線性關系
If = Kc
(2)定量方法:校正曲線法
標準曲線法：
配制一系列標準濃度試樣測定熒光強度，繪制標準曲線，再在相同條件下測量未知試樣的熒光強度，在標準曲線上求出濃度;
三、實驗內容
?1.儀器和試劑:
儀器:熒光分光光度計,刻度吸管,容量瓶
試劑:0.1μg/ml硫酸奎寧(儀器室),
100μg/ml硫酸奎寧標準溶液,
硫酸奎寧待測液
0.05mol/l稀硫酸溶液
?2.實驗步驟:
1.標準溶液的制備:
精密吸取硫酸奎寧標液(100μg/ml,0.05 mol/L硫酸溶解)1.0、2.0、3.0、4.0及5.0ml分別置于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,制得對照品的標準系列溶液,并計算濃度.
2.待測試樣溶液的制備:
吸取硫酸奎寧待測液1.0ml,于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,得待測試樣溶液.
3.測定:
(1)用0.1ug/ml的硫酸奎寧測定激發光譜和發射光譜:
開機—打開光譜掃描工作站--方法建立—調零--激發光譜的測定—發射光譜的測定—打印結果
(2)校正曲線法測定試樣溶液的濃度:
打開濃度測定工作站--方法建立--校正曲線的測定--試樣溶液的測定—打印結果--關機
注意事項：溶液配制過程中需應當規范操作各種容量儀器，防止誤差；樣品測定時，應該按照從低濃度到濃度的順序，盡可能的減少測量誤差；儀器校正后制作標準曲線的參數應該和測定樣品時保持一致
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