血清總膽固醇的測(cè)定——鄰苯二甲醛法
膽固醇是環(huán)戊烷多氫菲的衍生物，它不僅參與血漿蛋白的組成，而且也是細(xì)胞的必要結(jié)構(gòu)成分，還可以轉(zhuǎn)化成膽汁酸鹽、腎上腺皮質(zhì)激素和維生素D等。膽固醇在體內(nèi)以游離膽固醇及膽固醇酯兩種形式存在，統(tǒng)稱總膽固醇。總膽固醇的測(cè)定有化學(xué)比色法和酶學(xué)方法兩類。本實(shí)驗(yàn)采用前一方法。
膽固醇及其酯在硫酸作用下與鄰苯二甲醛產(chǎn)生紫紅色物質(zhì)，此物質(zhì)在550nm波長(zhǎng)處有最大吸收，可用比色法作總膽固醇的定量測(cè)定。膽固醇含量在400mg/100ml內(nèi)，與OD值呈良好線性關(guān)系。
本法不必離心，顏色產(chǎn)物也比較穩(wěn)定，膽紅素及一般溶血對(duì)結(jié)果影響不大，嚴(yán)重溶血者才使結(jié)果偏高。本法在20～37℃條件下顯色，顯色后5分鐘開始至半小時(shí)以上顏色基本穩(wěn)定。溫度過(guò)低，顯色劑強(qiáng)度減弱；加混合酸后振搖過(guò)激能使產(chǎn)熱過(guò)高，也可使顯色減弱。
試劑和器材
一、試劑
鄰苯二甲醛試劑：稱取鄰苯二甲醛50mg，以無(wú)水乙醇溶至50ml冷藏，有效期為一個(gè)半月。
混合酸：冰乙酸100ml與濃硫酸100ml混合。
標(biāo)準(zhǔn)膽固醇貯存液（1mg/ml）：準(zhǔn)確稱取膽固醇100mg，以冰乙酸溶至100ml。
標(biāo)準(zhǔn)膽固醇工作液（0.1mg/ml）：將上述貯存液以冰乙酸稀釋10倍: 即取10ml用冰乙
酸稀釋至100ml。
二、測(cè)試樣品
0.1ml人血清以冰乙酸稀釋至4.00ml。
三、器材
試管1.5×15cm（×12）；吸管0.5ml（×5），10ml（×1），0.1ml（×1）；WFJ UV-2000型分光光度計(jì)。
操作方法
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
取9支試管編號(hào)后，按下表順序加入試劑：
加畢，溫和混勻，20～37℃下靜置10分鐘，與550nm下比色測(cè)定，以總膽固醇量（mg%）為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
二、樣品測(cè)定
取3支試管編號(hào)后，分別加入試劑，與標(biāo)準(zhǔn)曲線同時(shí)作比色測(cè)定：
加畢，溫和混勻，20～37℃下靜置10分鐘，與550nm下比色測(cè)定，測(cè)得OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中可查出樣品的膽固醇含量。
注意事項(xiàng)：
（1）混合酸粘度大，要用封口膜充分混勻。保溫后如有分層，再次混勻。
（2）混合酸配制時(shí)，將濃硫酸加入冰乙酸中，次序不可顛倒。
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