血清總膽固醇的測定——鄰苯二甲醛法
膽固醇是環戊烷多氫菲的衍生物，它不僅參與血漿蛋白的組成，而且也是細胞的必要結構成分，還可以轉化成膽汁酸鹽、腎上腺皮質激素和維生素D等。膽固醇在體內以游離膽固醇及膽固醇酯兩種形式存在，統稱總膽固醇。總膽固醇的測定有化學比色法和酶學方法兩類。本實驗采用前一方法。
膽固醇及其酯在硫酸作用下與鄰苯二甲醛產生紫紅色物質，此物質在550nm波長處有最大吸收，可用比色法作總膽固醇的定量測定。膽固醇含量在400mg/100ml內，與OD值呈良好線性關系。
本法不必離心，顏色產物也比較穩定，膽紅素及一般溶血對結果影響不大，嚴重溶血者才使結果偏高。本法在20～37℃條件下顯色，顯色后5分鐘開始至半小時以上顏色基本穩定。溫度過低，顯色劑強度減弱；加混合酸后振搖過激能使產熱過高，也可使顯色減弱。
試劑和器材
一、試劑
鄰苯二甲醛試劑：稱取鄰苯二甲醛50mg，以無水乙醇溶至50ml冷藏，有效期為一個半月。
混合酸：冰乙酸100ml與濃硫酸100ml混合。
標準膽固醇貯存液（1mg/ml）：準確稱取膽固醇100mg，以冰乙酸溶至100ml。
標準膽固醇工作液（0.1mg/ml）：將上述貯存液以冰乙酸稀釋10倍: 即取10ml用冰乙
酸稀釋至100ml。
二、測試樣品
0.1ml人血清以冰乙酸稀釋至4.00ml。
三、器材
試管1.5×15cm（×12）；吸管0.5ml（×5），10ml（×1），0.1ml（×1）；WFJ UV-2000型分光光度計。
操作方法
一、制作標準曲線
取9支試管編號后，按下表順序加入試劑：
加畢，溫和混勻，20～37℃下靜置10分鐘，與550nm下比色測定，以總膽固醇量（mg%）為橫坐標，OD值為縱坐標做出標準曲線。
二、樣品測定
取3支試管編號后，分別加入試劑，與標準曲線同時作比色測定：
加畢，溫和混勻，20～37℃下靜置10分鐘，與550nm下比色測定，測得OD值從標準曲線中可查出樣品的膽固醇含量。
注意事項：
（1）混合酸粘度大，要用封口膜充分混勻。保溫后如有分層，再次混勻。
（2）混合酸配制時，將濃硫酸加入冰乙酸中，次序不可顛倒。
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