Voges-Proskauer(V-P) 試驗的原理及注意事項
一、試驗原理
細菌在葡萄糖代謝中生成丙酮酸，從丙酮酸開始，隨細菌種類不同而有多種分解途徑，有的使丙酮酸進一步分解，生成甲酸、乙酸、乳酸等終產(chǎn)物，有的可以使丙酮酸脫羧變?yōu)橹行宰罱K產(chǎn)物乙酰甲基甲醇（Acetylmethyl carbinol），亦稱 3-羧基丁酮（Acetoin）。本試驗即為檢查某些細菌在葡萄糖代謝中是否產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，作為鑒定依據(jù)。
乙酰甲基甲醇在堿性環(huán)境中可被空氣中的氧氣氧化為丁二酮（Diacetyl），丁二酮與蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色化合物，即為 V-P 試驗陽性。
肌酸或肌酸酐可供給比精氨酸更多的胍基，故有加快 V-P 試驗出現(xiàn)陽性反應(yīng)的作用。
不加α-萘酚，至少要有 10PPm 的丁二酮才能出現(xiàn)陽性，加入α-萘酚可使 V-P 試驗的靈敏度提高約 50 倍而不降低試驗的特異性，其酒精液還有增強顏色的作用。在試驗中，必須先加入α-萘酚，使其先與丁二酮和胍基復(fù)合物結(jié)合，然后才能加入 40% 氫氧化鉀溶液，加入量不得超過 0.2 ml。
若加入次序顛倒，氫氧化鉀可與蛋白胨某些成分反應(yīng)產(chǎn)生橙紅色而造成假陽性。氫氧化鉀作為氧化劑可加速乙酰甲基甲醇氧化為丁二酮，并有助于二氧化碳的吸收。
二、試驗結(jié)果判斷
三、注意事項
牛肉浸湯不能用于本試驗，因在肌肉浸出物中含有乙酰甲基甲醇、丁二酮以及其它干擾試驗的物質(zhì)，可造成假陽性。
V-P 試驗陽性菌偶爾也會不出現(xiàn)陽性反應(yīng)，為避免這種情況，可將加有試劑的培養(yǎng)物于 50℃ 左右輕微加熱，陽性菌即出現(xiàn)紅色，而真正陰性菌仍保持原色。
在通用培養(yǎng)基中，一般培養(yǎng) 1-3 天多數(shù)能出現(xiàn)陽性反應(yīng)，培養(yǎng)時間過長，可因產(chǎn)酸而使 V-P 反應(yīng)減弱或造成假陰性。
一般來說，V-P 試驗和甲基紅試驗多呈相反結(jié)果。但應(yīng)注意，這也不是絕對的，有少數(shù)細菌如蜂房哈夫尼亞菌（Hafnia alvei）和奇異變形桿菌有時兩試驗均出現(xiàn)陽性反應(yīng)。
本試驗一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽孢桿菌和葡萄球菌等其它細菌時，通用培養(yǎng)基中的磷酸鹽可阻礙乙酰甲基甲醇的產(chǎn)生，故應(yīng)省去或以氯化鈉代替。
關(guān)于 V-P 試驗培養(yǎng)物的培養(yǎng)溫度，一般多采用 35℃ 或 37℃，但日本有學(xué)者認為 37℃ 培養(yǎng)常使分解乙酰甲基甲醇的酶失去活性，故主張采用 28-30℃ 培養(yǎng)，夏季可培養(yǎng)于室溫。已知有少數(shù)細菌，如哈夫尼亞腸桿菌，在 37℃ 培養(yǎng)的 V-P 試驗結(jié)果常不穩(wěn)定，需在 25-30℃ 培養(yǎng)，才能獲得可靠結(jié)果。
作者：許英俊
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