水產品中孔雀石綠殘留量的測定液相色譜法（一）
1范圍
本標準規定了水產品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留量的液相色譜測定方法。
本標準適用于水產品可食部分中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留量的檢測。
2規范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。
GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法
3術語和定義
下列術語和定義適用于本標準。
3. 1
孔雀石綠 malachite green
屬于三苯甲烷染料類,分子式為C23H25CIN2，綠色結晶體。
注:孔雀石綠的結構式見附錄A。
3.2
無色孔雀石綠 leucomalachite green
N, N-二甲基苯胺，孔雀石綠在水生生物體中的主要代謝產物,分子式為C23H26N2。
注:無色孔雀石綠的結構式見附錄A。
4原理
以乙酸胺鹽溶液和乙腈提取樣品中的孔雀石綠和無色孔雀石綠后,經過液-液萃取、固相萃取,用接有氧化柱的C18柱進行高效液相色譜分析,外標法定量。
5試劑
5. 1所有試劑應無干擾峰，應選擇優級純或色譜純的試劑,分析純試劑應重蒸。
5. 2孔雀石綠及無色孔雀石綠標準品:孔雀石綠純度 ≥ 90%,無色孔雀石綠純度 ≥ 90%。
5. 3乙腈:色譜純。
5. 4二氯甲烷:分析純。
5.5鹽酸羥胺溶液：0.25g/mL。
5. 6二甘醇:分析純。
5. 7 乙酸鉉溶液:0. 1 mol/L(pH 4. 5),0. 125 mol/L(pH 4. 5)
5. 8對甲苯磺酸溶液:0. 05 mol/L。
5. 9堿性氧化鋁:分析純，粒度0. 071 mm~0. 150 mm。
5. 10中性氧化鋁:分析純，粒度0. 071 mm~0. 150 mm。
5. 11 丙基磺酸陽離子樹脂:PRS(propylsulfonic acid) ,40 μm。
5. 12孔雀石綠標準溶液:準確稱取孔雀石綠0. 100 0 g,用乙腈溶解,定容于100 mL容量瓶中，使成濃度為1 mg/mL的標準溶液，再用乙腈稀釋成0. 1 μg/mL的工作溶液。該溶液應避光保存。
5.13無色孔雀石綠標準溶液:準確稱取無色孔雀石綠0. 100 0 g,用乙腈溶解,定容于100 mL容量瓶中, 使成濃度為1 mg/mL的標準溶液，再用乙腈稀釋成0.1μg/mL的工作溶液。該溶液應避光保存。
5. 14二氧化鉛:分析純。
5.15硅藻土:精制工業硅藻土。
5.16水:應符合GB/T 6682的要求。
6儀器
6.1高效液相色譜儀:配可變波長檢測器。
6.2電子天平:感量0. 000 1 g。
6.3勻漿機。
6. 4離心機。
6. 5振蕩器。
6.6旋轉蒸發器。
6.7固相萃取柱:PRS柱，中性氧化鋁柱。
6. 8色譜柱:C18柱。
6.9柱后氧化柱:柱內填料:二氧化鉛:硅藻土=1 : 1。
7操作方法
7.1樣品處理
7. 1. 1取樣
魚去鱗、皮，沿背脊取肌肉；蝦去頭、殼，取可食肌肉部分;蟹、甲魚等取可食部分。所取樣品切為不大于0. 5 cm×0. 5 cm×0. 5 cm的小塊后混勻。
7.1.2稱取樣品10 g?20 g(精確至0. 001 g),置于勻漿杯中，向杯中依次加3 mL鹽酸羥胺溶液、5 mL 對甲苯磺酸溶液和20 mL 0. 1 mol/L的乙酸銨溶液，勻漿2 min,轉移到250 mL三角瓶中，用60 mL乙腈洗滌勻漿杯，洗滌液合并到三角瓶中，加入20 g堿性氧化鋁,用振蕩器振蕩5 min,轉移至4支50 mL離 心管內，30mL乙腈洗滌三角瓶后轉移到離心管中,4 000 r/min離心15 min
7.2分離純化
7. 2. 1液-液萃取
7.2. 1. 1將離心管上清液移入分液漏斗中，向離心管中加入乙腈，洗滌，離心(4 000 r/min, 15 min),合 并上清液到分液漏斗中,并加入100 mL水、50 mL二氯甲烷和2 mL二甘醇，劇烈振搖分液漏斗，靜置 1 h。
7.2. 1. 2用蒸發瓶收集下層液體后，再往分液漏斗加入50 mL二氯甲烷，振搖，靜置約10 min,待其分層 后收集下層液體于同一蒸發瓶。將收集液在35°C下減壓旋轉蒸發(注意:開始時溫度不要直接升到35°C , 以免爆沸)至體積2 mL?3 mL。
7. 2.2固相柱萃取
7. 2. 2. 1固相柱制備
采用中性氧化鋁(1 g)、PRS填料(0. 5 g)分別裝填2只固相萃取柱，按中性氧化鋁柱在前、PRS柱在后的順序將兩柱串聯。
7. 2. 2. 2 上樣
使用前用5 mL乙臘預洗兩柱，然后將7. 2. 1. 2濃縮液體加入5 mL乙腈混勻后，緩慢加入中性氧化鋁柱內(注意:不要引起柱表面填料浮動)。再用5 mL乙腈洗滌蒸發瓶2次，2次洗滌液均加入柱內，最后用5 mL乙腈洗滌兩柱。
7. 2. 2. 3洗脫收集
文章來源：《水產品獸藥殘留限量及監測方法查詢手冊》
版權與免責聲明：轉載目的在于傳遞更多信息。
如其他媒體、網站或個人從本網下載使用，必須保留本網注明的"稿件來源"，并自負版權等法律責任。
如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起兩周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
