水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定——液相色譜-串聯質譜法（一）
1 范圍
本標準規定了水產品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠(leucomalachite green)、結晶紫及其代謝物隱色結晶紫(leucocrystal violet)殘留量的液相色譜-串聯質譜和高效液相色譜的測定方法。
本標準適用于鮮活水產品及其制品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠、結晶紫及其代謝物隱色結 晶紫殘留量的檢驗。
2 液相色譜-串聯質譜法
2. 1 原理
試樣中的殘留物用乙月青-乙酸鉉緩沖溶液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷層，經中性氧 化鋁和陽離子固相柱凈化后用液相色譜-串聯質譜法測定，內標法定量。
2.2 試劑和材料
除另有規定外，所有試劑均為分析純，水為重蒸餾水。
2.2. 1 乙腈：液相色譜純。
2.2.2 甲醇：液相色譜純。
2.2.3 二氯甲烷。
2.2.4 無水乙酸銨。
2.2.5 5 mol/L乙酸銨緩沖溶液：稱取38. 5 g無水乙酸銨溶解于90 mL水中，冰乙酸調pH到7. 0，用 水定容至100 mL。
2.2.6 0.1 mol/L乙酸銨緩沖溶液：稱取7.71 g無水乙酸銨溶解于1 000 mL水中，冰乙酸調pH到 4.5。
2.2.7 5 mmol/L乙酸銨緩沖溶液：稱取0. 385 g無水乙酸銨溶解于1 000 mL水中，冰乙酸調pH到 4. 5，過 0. 2 μm 濾膜。
2.2.8 冰乙酸。
2. 2. 9 0. 25 g/mL鹽酸羥胺溶液。
2.2.10 1. 0 mol/L對-甲苯磺酸溶液：稱取17.2 gM-甲苯磺酸，用水溶解并定容至100 mL。
2.2. 11 體積分數為2%的甲酸溶液。
2. 2. 12 體積分數為5%的乙酸銨甲醇溶液：量取5 mL乙酸銨緩沖溶液(2. 2. 5)用甲醇定容至100 mL。
2.2.13 陽離子交換柱：MCX，60 mg/3 mL，使用前依次用3 mL乙腈、3 mL甲酸溶液(2. 2. 11) 活化。
2. 2.14 中性氧化鋁柱：1 g/3 mL，使用前用5 mL乙腈活化。
2.2.15 標準品：孔雀石綠(MG)、隱色孔雀石綠(LMG)、結晶紫(CV)、隱色結晶紫(LCV)、同位素內標氘代孔雀石綠(Ds-MG)、同位素內標氘代隱色孔雀石綠(D6-LMG)，純度大于98%。
2.2.16 標準儲備溶液：準確稱取適量的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫、氘代孔雀石綠、 氘代隱色孔雀石綠標準品，用乙腈分別配制成100μg/mL的標準儲備液。
2.2.17 混合標準儲備溶液(1 μg/mL)：分別準確吸取1.00 mL孔雀石綠、結晶紫、隱色孔雀石綠和隱色結晶紫的標準儲備溶液(2. 2. 16)至100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，1 mL該溶液分別含1μg的孔雀石綠、結晶紫、隱色孔雀石綠和隱色結晶紫。一18°C避光保存。
2.2.18 混合標準儲備溶液(100 ng/mL):用乙腈稀釋混合標準儲備溶液(2. 2.17)，配制成每毫升含孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫均為100 ng的混合標準儲備溶液。一18°C避光保存。
2.2.19 混合內標標準溶液：用乙睛稀釋標準溶液(2. 2.16)，配制成每毫升含氘代孔雀石綠和氘代隱色孔雀石綠各100 ng的內標混合溶液。一18°C避光保存。
2.2.20 混合標準工作溶液：根據需要，臨用時吸取一定量的混合標準儲備溶液(2. 2.18)和混合內標標準溶液(2. 2.19)，用乙腈+ 5 mmol/L乙酸鉉溶液(1 + 1)稀釋配制適當濃度的混合標準工作液，每毫升該混合標準工作溶液含有氘代孔雀石綠和氘代隱色孔雀石綠各2 ng。
2.3 儀器和設備
2.3.1 高效液相色譜-串聯質譜聯用儀:配有電噴霧(ESI)離子源
2.3.2 勻漿機
2. 3. 3 離心機：4 000 r/min
2.3.4 超聲波水浴
2.3.5 渦旋振蕩器
2.3.6 KD 濃縮瓶：25 mL
2.3.7 固相萃取裝置
2.3.8 旋轉蒸發儀
文章來源：《水產品獸藥殘留限量及監測方法查詢手冊》
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