蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)—坂口反應(yīng)實(shí)驗(yàn)
【實(shí)驗(yàn)原理】
蛋白質(zhì)在堿性溶液中與次氯酸鹽（或次溴酸鹽）和α-萘酚作用產(chǎn)生紅色的產(chǎn)物。這是由于蛋白質(zhì)分子中精氨酸胍基的特征反應(yīng)。許多胍的衍生物如胍乙酸、胍基丁胺等也發(fā)生此反應(yīng)。精氨酸是唯一呈正反應(yīng)的氨基酸，反應(yīng)靈敏度達(dá)1：250000。
【Principle】
Protein react with sodium bromate solution and α-naphthol solution in alkali condition to produce red component. This is a special reaction of arginine’s carbamidine, which is useful in quantitating and determining the natures of protein and the amino acid. The reaction is shown as below.
生成的氨可被次溴酸鈉氧化生成氮。在次溴酸鈉緩慢作用下，有色物質(zhì)繼續(xù)氧化，引起顏色消失，因此過量的次溴酸鈉對(duì)反應(yīng)不利。加入濃尿素，破壞過量的次溴酸鈉，能增加顏色的穩(wěn)定性。此反應(yīng)可以用來定性鑒定含有精氨酸的蛋白質(zhì)和定量測定精氨酸的含量。
【 試劑 】
1.蛋白質(zhì)溶液：與雙縮尿反應(yīng)相同
2.次溴酸鈉溶液
3.10%NaOH溶液
4.0.2%α-萘酚溶液
5.0.01%精氨酸溶液
【實(shí)驗(yàn)操作】
1． 于 試管 中加入蛋白質(zhì)溶液1ml，再加10%NaOH溶液0.5ml，0.2%α-萘酚2滴，混合后再加次溴酸鈉溶液2滴，觀察現(xiàn)象
2． 取0.01%精氨酸溶液1ml，按上述操作觀察現(xiàn)象
【Reagent】
1.Protein solution (the same as biuret reaction)
2.Sodium bromate solution
3. 10% NaOH solution
4.0.2%α- naphthol solution
5. 0.01% arginine solution
【Procedures】
1.1ml of protein solution is added into a test tube, then 0.5 ml of 10%NaOH solution and two drops of 0.2%α- naphthol are added. After mixing, 2 drops of sodium bromate solution are added, and then observe the phenomenon.
2.Add 1 ml of 0.01% arginine solution according to the same procedure above，then observe the phenomenon.
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