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植物體內可溶性糖含量的測定(蒽酮法)
發布日期:2022-08-15 08:54:35


植物體內可溶性糖含量的測定(蒽酮法)


一 、目的 :


糖類物質是構成植物 體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質。不同載培條件,不同成熟度都可以影響水果、蔬菜中糖類的含量。因此對水果、蔬菜中可溶性糖的測定,可以了解和鑒定水果、蔬菜品質的高低。


二、原理


糖類遇濃硫酸脫水生成糖醛或其衍生物,反應如下:


糠醛或羥甲基糠醛進一步與蒽酮試劑縮合產生藍綠色物質,其在可見光區620nm波長處有最大吸收,且其光吸收值在一定范圍內與糖的含量成正比關系。


此法可用于單糖、寡糖和多糖的含量測定,并具有靈敏度高,簡便快捷,適用于微量樣品的測定等優點。


三、實驗材料、儀器及試劑


1.材料:白菜葉、柑桔


2.儀器:分光光度計 恒溫水箱 20ml具塞刻度試管(3支) 漏斗 100ml容量瓶 刻度試管 試管架 剪刀 研缽


3.試劑:


(1)200μg/ml標準葡萄糖:AR級葡萄糖100mg,蒸餾水溶解,定容至500ml。


(2)蒽酮試劑:1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光處貯藏;


(3)濃硫酸


四、實驗方法


1.葡萄糖標準曲線的制作

取6支20ml具寒試管,編號,按下表數據配制一系列不同濃度的標準葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮試劑,再緩慢地加入5ml濃H2SO4,搖勻后,打開試管塞,置沸水浴中煮沸10分鐘,取出冷卻至室溫,在620nm波長下比色,測各管溶液的光密度值(OD),以標準葡萄糖含量為橫坐標,光密度值為縱坐標,作出標準曲線。


2.樣品中可溶性糖的提取

稱取1克白菜葉,剪碎,置于研缽中,加入少量蒸餾水,研磨成勻漿,然后轉入20ml刻度試管中,用10ml蒸餾水分次洗滌研缽,洗液一并轉入刻度試管中。置沸水浴中加蓋煮沸10分鐘,冷卻后過濾,濾液收集于100ml容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,搖勻備用。


3.糖含量測定

用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度試管中,加1ml水和0.5ml蒽酮試劑。再緩慢加入5ml濃H2SO4(注意:濃硫酸遇水會產生大量的熱!),蓋上試管塞后,輕輕搖勻,再置沸水浴中10分鐘(比色空白用2ml蒸餾水與0.5ml蒽酮試劑混合,并一同于沸水浴保溫10分鐘)。冷卻至室溫后,在波長620nm下比色,記錄光密度值。查標準曲線上得知對應的葡萄糖含量(μg)。


五、結果計算


六、附注

(1)加濃H2SO4時應緩慢加入,以免產生大量熱量而爆沸,灼傷皮膚,如出現上述情況,應迅速用自來水沖洗。

(2)水浴加熱時應打開試管塞。





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