彈性蛋白酶活性測定
問:我要檢測痰中彈性蛋白酶的活力,買的是sigma的底物,在410nm處比色,請問最后酶活力用什么單位來表示呢?加完底物后,立即比色,我隔5分鐘就測定一次,一共測了一個小時。最后只得出了OD值,看相關書籍及各位戰友以前的帖子,發現需要劃出標準曲線,請各位高手指教,具體的測酶活力的具體步驟好嗎?要做哪些標準曲線呢?
答:您每5min進行一次測定,我想目的應該是對酶反應時間進行考察,從而得出彈性蛋白酶與底物完全反應所需的時間,理論上應該是以相同的量比的彈性蛋白酶(過量)與底物若干份,分別孵育不同的時間,再進行檢測,得出反應時間-OD值曲線,從中預測所需反應時間。下一步再進行標準曲線的測定,目的就是進行OD值與酶活力單位的換算,這樣才能進行定量分析。設計標準曲線時應注意底物空白的設置。接著進行樣品的測定,得到的OD值經標準曲線換算得到酶活力單位(U)。
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