琥珀酸脫氫酶及丙二酸的抑制作用
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1.掌握測(cè)定琥珀酸脫氫酶活性的簡(jiǎn)易方法及其原理。
2.了解丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。
二、實(shí)驗(yàn)原理
琥珀酸脫氫酶是三羧酸循環(huán)中一個(gè)重要的酶，測(cè)定細(xì)胞中有無琥珀酸脫氫酶活性可以初步鑒定三羧酸循環(huán)途徑是否存在。
琥珀酸脫氫酶能使琥珀酸脫氫生成延胡素酸，并將脫下的氫交給受氫體。用甲烯藍(lán)(美藍(lán))作受氫體時(shí)，甲烯藍(lán)被還原生成無色的甲烯白(美白)，其反應(yīng)如下：
丙二酸是琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制刑。細(xì)菌 量越多或脫氫酶活性越高甲烯藍(lán)脫色所需時(shí)間越短。因此，甲烯藍(lán)脫色所需時(shí)間的倒數(shù)可用來表示酶的活性或細(xì)菌生長的情況。
根據(jù)上述原理，可用甲烯藍(lán)脫色法來測(cè)定脫氫酶或細(xì)菌含量。例如，在評(píng)定牛奶的等級(jí)時(shí)，可用此法測(cè)定牛奶中的雜菌含量，脫色越快，含菌量越高，牛奶質(zhì)量越差。由于甲烯藍(lán)容易被空氣中的氧所氧化，所以實(shí)驗(yàn)需在無氧情況下進(jìn)行。常用Thnbe ro(鄧氏)管抽去空氣進(jìn)行反應(yīng)，也可簡(jiǎn)化為，用液體石臘(或凍結(jié)瓊脂 )封閉反應(yīng)液，制造無氧環(huán)境，這樣可不用抽真空設(shè)備。
三、儀器、原料和試劑
儀器
試管、恒溫水浴鍋、研缽。
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