分子信標技術及其應用研究進展
Tyagi和Krammer于1996年設計了一種可以特異性識別核酸序列的新型熒光探針,這種熒光探針通過與核酸靶分子進行雜交后發生構象的變化而發出熒光,他們將其命名為分子信標(Molecular Beacon)。
分子信標具有背景信號低,靈敏度高、特異識別性強、操作簡單，不必與未反應的探針分離即可實時檢測，可用于活體分析等優點。
在生物化學分析，生物醫學研究和臨床診斷中有著廣泛的應用價值。
分子信標的結構
（1）環狀區（長度15～30個堿基的序列，可以與靶序列特異性結合）
（2）信標莖桿區（長度為5～8個堿基的互補序列，使得形成發夾結構，與靶序列無關）
（3）熒光基團和猝滅基團（通過共價鍵連接在莖桿區的末端，熒光基團聯接在信標分子的5’-端，猝滅基團聯接在3’-端）
分子信標作用原理
無靶標存在下，莖環結構使得熒光基團和猝滅基團相互靠近，發生熒光共振能量（FRET）轉移，熒光猝滅，熒光背景極低。
加入靶序列后，分子信標與完全互補靶序列形成剛性并且更加穩定的雙鏈雜交體，使得熒光基團和猝滅基團距離增大，阻止了FRET的發生，熒光恢復。
分子信標的設計
序列長度（環狀序列比莖桿序列長兩倍以上，莖桿序列不能過長或過短）
莖桿序列中G和C的含量不能太高
5’-端的第一個堿基最好不要選擇G
由于被測對象DNA或RNA是大分子，存在扭曲現象，因此要選擇被測對象的外圍堿基序列，即容易接近的那段序列來設計信標。
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