氨基酸紙層析法原理和操作步驟
相關(guān)知識
1. 層析法（色譜法）：是一種物理的分離方法。它是利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在兩個相中，其中一個相為固定的（稱為固定相），另一個相則流此固定相（稱為流動相）并使各組分以不同速度移動，從而達分離。
2．幾種常用的層析法
①吸附層析
②離子交換層析
③薄層層析
④凝膠層析（凝膠過濾）
⑤親和層析
⑥分配層析（適于在水，有機溶劑中都可溶的混合物）
當(dāng)把一種物質(zhì)在兩種不混溶的溶劑中振蕩時，它將在這兩相中不均勻的分配。達到平衡時，這種物質(zhì)在兩種溶劑中的濃度之比是一個常數(shù)，即分配系數(shù)。
如果某一混全物的各組分在這兩相中的分配系數(shù)有足夠的差異，它們就可以被分離。
3．氨基酸的極性大小及各氨基酸結(jié)構(gòu)
一、實驗?zāi)康?nbsp;
１．通過氨基酸的分離，學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理及操作方法
２．掌握氨基酸紙上層析法的操作技術(shù)（點樣、平衡、展層、顯色、鑒定）
二、實驗原理
紙層析法是分配層析的一種，以濾紙作為惰性支持物。層析溶劑（擴展劑）由有機溶劑和水組成。
在紙上水被吸附在纖維素的纖維之間形成固定相。由于纖維素上的羥基具有親水性，和水以氫鍵相連，使這部分水不易擴散，所以能與跟水混合的溶劑仍然形成類似不相混合的兩相。當(dāng)有機相沿紙流動經(jīng)過層析點時，層析點上溶質(zhì)就在水相和有機相之間進行分配，有一部分溶質(zhì)離開原點隨有機相移動而進入無溶質(zhì)的區(qū)域，這時又重新進行分配，一部分溶質(zhì)從有機相進入水相。當(dāng)有機相不斷流動時，溶質(zhì)就沿著有機相流動的方向移動，不斷進行分配。溶質(zhì)中各組分的分配系數(shù)不同，移動速率也不同，因而可以彼此分開。物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf值（比移）來表示的。
在一定的條件下某種物質(zhì)的R f 值是常數(shù)。R f 值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、 P H層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。氨基酸、糖、核甘酸、甾體激素、維生素、抗生素等很多物質(zhì)都能用紙上層析法分離。上層層析、下層層析、單向?qū)游觥㈦p向?qū)游觥?nbsp;
三、 儀器 、材料和試劑
儀器 ：每組學(xué)生準(zhǔn)備尺子、小剪子或小刀
1．層析缸、培養(yǎng)皿、量筒、小燒杯、長頸漏斗、毛細管、吹風(fēng)機、電熱鼓風(fēng)干燥箱、層析濾紙、手套 、透明膠帶。
實驗材料和 試劑
1．標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液 分別配制0.5%的Lys、Ala、Ile、Met溶液
2．待分離測定的混合氨基酸溶液
３．顯色劑 0.1%水合茚三酮丙酮溶液。
４．?dāng)U展劑（展層劑）：本實驗使用酸溶劑系統(tǒng)
酸溶劑系統(tǒng)：正丁醇:80%甲酸:水＝15:3:2（體積比），平衡溶劑與擴展劑相同。
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