酮體的生成和利用
【 實驗目的 】
了解酮體的生成部位及掌握測定酮體生成與利用的方法。
【 實驗原理 】
在肝臟線粒體中，脂肪酸經β-氧化生成的過量乙酰輔酶A縮合成酮體。酮體包括乙酰乙酸、β-羥丁酸和丙酮三種化合物。肝臟不能利用酮體，只有在肝外組織，尤其是心臟和骨骼肌中，酮體可以轉變為乙酰輔酶A而被氧化利用。
本實驗以丁酸為基質，與肝勻漿一起保溫，然后測定肝勻漿液中酮體的生成量。另外，在肝臟和肌肉組織共存的情況下，再測定酮體的生成量。在這兩種不同條件下，由酮體含量的差別我們可以理解以上的理論。本實驗主要測定的是丙酮的含量。
酮體測定的原理：在堿性溶液中碘可將丙酮氧化成為碘仿。以硫代硫酸鈉滴定剩余的碘，可以計算所消耗的碘，由此也就可以計算出酮體（以丙酮為代表）的含量。反應式如下：
【 實驗材料 】
1. 實驗器材
試管；移液管；錐形瓶；滴定管及架。
2. 實驗 試劑
(1)0.1% 淀粉液。
(2)0.9% NaCl溶液。
(3)15% 三氯乙酸。
(4) 10％ NaOH溶液。
(5)10％ HCl溶液。
(6) 0.5mol/L丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml 0.5mol/L NaOH中。
(7) 0.1mol/L碘液：I2 12.5g和KI 25g加水溶解，稀釋至刻度1L，用0.1mol/L Na2S2O3標定。
(8) 0.02mol/L Na2S2O3: 24.82g Na2S2O3·5H2O和400mg無水Na2CO3溶于1L剛煮沸的水中，配成0.1mol/L溶液，用0.1mol/L KIO3標定。臨用時將標定Na2S2O3溶液稀釋成0.02mol/L。
【 實驗操作 】
1.標本的制備：
將兔致死，取出肝臟，用0.9% NaCl洗去污血，放濾紙上，吸去表面的水分，稱取肝組織5g置研缽中，加少許0.9% NaCl至總體積為10ml，制成肝組織勻漿。另外再取后腿肌肉 5g，按上述方法和比例，制成肌組織勻漿。 2.保溫和沉淀蛋白質：
取試管3只，編號，按下表操作：
管號 試劑 | A | B | C |
肝組織勻漿 | — | 2.0 ml | 2.0 ml |
預先煮沸的 肝組織勻漿 | 2.0 ml | — | — |
pH 7.6的 磷酸鹽緩沖液 | 4.0 ml | 4.0 ml | 4.0 ml |
正丁酸 | 2.0 ml | 2.0 ml | 2.0 ml |
43℃水浴保溫60分鐘
肌組織勻漿 | — | 4.0 ml | — |
預先煮沸的 肌組織勻漿 | 4.0 ml | — | 4.0 ml |
43℃水浴保溫60分鐘
15%三氯醋酸 | 3.0 ml | 3.0 ml | 3.0 ml |
搖勻后，用濾紙過濾，將濾液分別收集在3支 試管 中,為無蛋白濾液。
3.酮體的測定
取錐形瓶3只，按下述編號順序操作：
編 號 試 劑 | 1 | 2 | 3 |
無蛋白濾液 | 5.0 ml | 5.0 ml | 5.0 ml |
0.1mol/L I 2 -KI | 3.0 ml | 3.0 ml | 3.0 ml |
10% NaOH | 3.0 ml | 3.0 ml | 3.0 ml |
搖勻，靜置10分鐘，向各管中加入10% HCl 3ml,加1%淀粉液1滴呈蘭色，分別用0.02mol/L Na2S2O3滴定至溶液呈亮綠色為止。
【 實驗結果與計算 】
肝臟生成的酮體量（mmol/g）=(C－A)×Na 2 S 2 O 3 的摩爾數×1/6
肌肉利用的酮體量（mmol/g）=(C－B)×Na 2 S 2 O 3 的摩爾數×1/6
A: 滴定樣品1消耗的Na 2 S 2 O 3 ml數。
B: 滴定樣品2消耗的Na 2 S 2 O 3 ml數。
C: 滴定樣品3消耗的Na 2 S 2 O 3 ml數。
【 思考 】
為什么只有在肝外組織，酮體才可以被氧化利用
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