薄層層析和紙層析
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1．了解色譜法的基本原理及薄層層析和紙層析的用途
2．學(xué)習(xí)并掌握薄層層析和紙層析的操作方法
二、實(shí)驗(yàn)原理：
色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能的不同。或其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組分分開。
用途：分離，純化，鑒定有機(jī)物的重要方法。
| 溶質(zhì)的最高濃度中心至原點(diǎn)中心的距離 |
| 溶劑前沿至原點(diǎn)中心的距離 |
三、所用試劑及儀器：
偶氮苯，蘇丹III，偶氮苯和蘇丹三混合物，9:1環(huán)己烷：乙酸乙脂，天門冬氨酸 蛋氨酸，茚三酮乙醇溶液；薄層板，毛細(xì)管，展開缸，10：50：2的水-乙醇-冰醋酸。
四、操作步驟：
（一）薄層層析：偶氮苯和蘇丹III的分離
薄層板的制備：將3g硅膠G和5%羧甲基纖維素鈉(CMC)水溶液混合調(diào)勻呈糊狀，傾倒在潔凈的玻璃片上，制成均勻平整的薄層板。室溫放置0.5h后，防入 烘箱 中110 0 C,0.5h取出備用。
點(diǎn)樣：在距離薄層板一端1.5cm處，用鉛筆輕輕劃一條線起始線，并用毛細(xì)管分別點(diǎn)上偶氮苯，混合樣，蘇丹III。
展開：用9：1的環(huán)己烷-乙酸乙脂為展開劑，待樣點(diǎn)干燥后，放入展開瓶中展開（注意：展開劑不易過多，使樣點(diǎn)浸入0.5cm為宜）當(dāng)展開劑到達(dá)薄板上端1cm處時，將薄板取出，并用鉛筆劃出溶劑前沿。觀察分離情況計(jì)算并比較二者的R f 值。
（二）紙層析：天門冬 氨基酸 和蛋氨酸的分離
在特定展開劑中分配系數(shù)的不同，采用標(biāo)準(zhǔn)樣品和試樣在同一張層析紙上進(jìn)行層析。比較它們的R f 值，以達(dá)到分離和鑒定 氨基酸 的目的。
吸取20ml展開劑（10：50：2的水-乙醇-冰醋酸），放入展開缸中，按圖3.38制備層析 濾紙
點(diǎn)樣（同薄層層析）
展開：待樣點(diǎn)干燥后，小心地置于事先盛有展開劑的展開缸中。
顯色：當(dāng)溶劑前沿到達(dá)終點(diǎn)線時，取出紙條并用吹風(fēng)機(jī)吹干，將茚三酮溶液均勻地噴在 濾紙 上，干燥后出現(xiàn)紅斑點(diǎn)。
求R f 值，對照標(biāo)樣和混合樣品的R f 值，以鑒定混合樣中的氨基酸。
注意事項(xiàng)
制板時要求薄層平滑均勻，無裂縫。
放入展開瓶中的溶劑不易過多
點(diǎn)樣時不要刺破薄板
點(diǎn)樣管切勿弄混
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