毛細(xì)管電泳技術(shù)(CE,capillary electrophoresis)
毛細(xì)管電泳技術(shù)也稱為高效毛細(xì)管電泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)。是從傳統(tǒng)電泳發(fā)展而來的新型高效的分析分離技術(shù)。1967年Hjerten最先提出區(qū)帶電泳。1974年Virtanen提出用200—500μm內(nèi)徑的毛細(xì)管作電泳分離。 1981年Jorgenson和Lukace首先提出在細(xì)管徑毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行電泳。
1 原理
毛細(xì)管電泳的基本原理是:緩沖液中不同帶電離子在高壓(10—30KV)電場作用下,以石英毛細(xì)管為分離痛道,被分離物以不同的速度遷移而達(dá)到分離的目的。
2 實(shí)驗(yàn)流程
制備樣品→選擇適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)程序→清洗毛細(xì)管→更換電泳緩沖液進(jìn)行電泳→同時(shí)在線檢測
3 特點(diǎn)
優(yōu)點(diǎn):分離操作時(shí)間短,最快可達(dá)幾秒;分離效率高;樣品用量少,容劑消耗少,環(huán)境污染小;操作自動(dòng)化程度高,可用計(jì)算機(jī)控制實(shí)現(xiàn)軟件分析。缺點(diǎn):制備能力差;由于毛細(xì)管電泳采用內(nèi)徑極小,而只能進(jìn)行微量分析;不能對多個(gè)樣品進(jìn)行平行處理,而只能對單個(gè)樣品進(jìn)行多次進(jìn)樣分析,缺乏平行對照,這要求很高的重復(fù)性。
4 應(yīng)用
毛細(xì)管電泳技術(shù)可應(yīng)用于:無機(jī)及有機(jī)化合物的分離分析;蛋白質(zhì)、氨基酸、肽的分離分析;核酸的分離分析;對映體的分離分析;CE在藥物及臨床分析中的應(yīng)用。目前,毛細(xì)管電泳應(yīng)用于作物貯藏蛋白研究中具獨(dú)特優(yōu)勢,特別是在品種及種質(zhì)指紋圖譜構(gòu)建,優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)亞基的快速鑒定、篩選與品質(zhì)改良,以及目的基因的分離、克隆 與鑒定等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。
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