貼壁細胞傳代培養(yǎng)

貼壁細胞傳代實驗準備：
將15mL離心管、T25細胞培養(yǎng)瓶、PBS緩沖液、移液管、電動移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒滅菌；
細胞完全培養(yǎng)基、0.25%胰酶-0.02%EDTA從4℃冰箱中取出后，復溫至室溫，備用。

貼壁細胞傳代實驗步驟：
1. 將準備好的培養(yǎng)基等物品用酒精消毒后放入安全柜中；
2. 從培養(yǎng)箱中取出待處理的細胞，在顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)；
3. 用酒精消毒培養(yǎng)瓶，放入安全柜中；
4. 輕輕吸去細胞上清；
5. 加入2~3ml PBS緩沖液潤洗一次，吸去上清；
6. 加入1mL 0.25%胰酶-0.02%EDTA，輕輕晃勻、覆蓋所有細胞后，置于37℃培養(yǎng)箱靜置消化；
7. 消化1min左右，在顯微鏡下觀察細胞消化情況；
8. 消化完全后，加3ml完全培養(yǎng)基終止；
9. 按比例將細胞懸液分裝至培養(yǎng)瓶中；
10. 在顯微鏡下觀察傳代后的細胞密度及狀態(tài)；
11. 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項：
1）培養(yǎng)過程中需維持細胞處于對數生長期，80%左右即可傳代，傳代比例請參照說明書建議；
2）消化時間不宜過長，大部分細胞回縮變圓并有少量細胞脫落即可中止消化，難消化的細胞可分次消化，每次時間不超過5min；
3）培養(yǎng)過程中需要定期換液，一般細胞建議2~3天換液一次。