正常小鼠腎間質成纖維細胞的培養

實驗材料：

1. 腎組織：取自8周齡健康雌性小鼠；

2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；

3. 0.1%明膠：為生長基質成分，在取材前先用它包被培養瓶的生長面；

4. 消化液：0.1%胰蛋白酶溶液；

5. 培養液：DMEM培養液，補充20%的胎牛血清、成纖維細胞生長因子（α-FGF）2μg/ml、慶大霉素100μg/ml、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml；

6. 用于細胞鑒定的抗體：抗細胞角蛋白（cytokeratin）抗體、抗角蛋白（keratin）抗體、抗波形蛋白（vimentin）抗體、抗結蛋白（des min）抗體、抗α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscular actin，α-SMA）抗體；

7. 眼科剪、眼科鑷等無菌消毒手術器械；

8. 網篩：100目、150目；

9. 離心管（15ml、50ml）；

實驗方法：

1. 取材；

① 斷頸處死小鼠，在無菌條件下迅速取出腎臟，用生理鹽水沖洗干凈，剝離腎被膜；

② 切取腎皮質，將皮質組織剪成2—3mm的細條。在100目不銹鋼網篩上輕輕研磨，并用生理鹽水沖洗，收集濾液。將濾液再用150目的網篩過濾，收集網篩上富含腎小管的間質碎片；

③ 在倒置顯微鏡下觀察收集的間質碎片，其中應主要為腎小管節段。如果混有較多的腎小球，則須將收集到的間質碎片再放置到150目網篩上沖洗，直至腎小管純度達98%以上后才進行下面的步驟；

④ 用培養液懸浮收集的腎小管節段；

2. 接種與培養；

① 將腎小管節段懸液加入已用明膠包被的培養瓶內。于37℃、5%CO2 培養箱中培養。每4—5d換液一次。

② 待細胞長滿瓶壁后，用0.1%胰蛋白酶消化傳代。每4—5d傳代一次，通常連接傳代至第三代時即可獲得較純的成纖維細胞。一般可傳10代左右；

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