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化學發光
發布日期:2025-12-17 16:58:23


化學發光



所謂化學發光,專業解釋為兩種或多種化學物質發生氧化還原反應,產生一個處于激發態的中間體,當這個中間體回到基態時釋放出光子,其發光能量來自于化學反應中釋放的能量,即化學能。這個過程分為兩種,直接發光和間接發光。

直接發光是最簡單的化學發光反應,其標記物(如吖啶酯)自身具有發光基團,在免疫反應后,僅需加入堿性溶液和過氧化氫等氧化劑,即可直接發生發光反應,無需催化劑。
(直接化學發光)

間接發光其標記物是酶(如ALP或HRP)。免疫反應后,加入相應的發光底物(如ALP對應AMPPD,HRP對應魯米諾),酶催化底物反應并產生光信號,又稱酶促化學發光。
(酶促化學發光)

在化學發光體系中,目前常用的直接發光標記物有魯米諾類和吖啶酯類,間接發光有辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP),發光底物以魯米諾、AMPPD為代表。

此應用中最為普及的當屬與免疫相結合的分析檢測手段,行業內稱為化學發光免疫分析方法(CLIA),另外在科研實驗里,蛋白電泳轉印后通過ECL化學發光試劑盒檢測則是最為常用的。
Western Blot(蛋白免疫印跡): 最經典的應用,用HRP標記的二抗與目標蛋白結合,加入化學發光底物后,HRP催化底物發光,通過曝光或化學發光成像來檢測蛋白條帶。