淋巴細胞轉化

實驗步驟

采血：

需要在嚴格無菌條件下采血。肝素抗凝，室溫保存，24hr-72hr轉化效率高。也有保存更長時間，采血后不要將血液置冰箱中，長途運輸也不要冷藏。

分離淋巴細胞：

采集血液4-5mL，與2mL1640（含1%雙抗）在離心管內混合，然后緩慢沿管壁注入淋巴分離液（已37℃預熱），3000rpm離心30min。

收集白細胞層，轉移至另一離心管中，加入10mL1640（含1%雙抗），輕輕吹打均勻，1500 rpm離心15min。棄上清，如此反復洗滌3次，收集白細胞。

轉化

取1 mL全培養基（+0.5%pHA）加入已經洗滌三次的白細胞離心管中，輕輕吹打均勻，轉入24孔板中，加入自備EBV液0.6mL，20ug/ mL環孢霉素0.2 mL，放入37℃5%CO2培養箱中培養。

3-4天后觀察細胞，鏡下可見集合的細胞團，以及已被轉化的明顯增大的類淋母細胞，4-5天后可加入0.5 mL全培養基（1640+15%FBS+1%雙抗+1.6%1M Hepes），然后視細胞生長情況更換培養基，并且轉入培養瓶中。

附：

EBV液制備：

培養B95-8細胞，待細胞長滿，培養基變黃，收集于50mL離心管中，于-80℃冰箱中，過夜，37℃水浴融化，再置于-80℃冰箱中，如此反復凍融三次，2000 rpm離心20min，上清0.2um過膜，-80℃冰箱中凍存備用。

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