CHO細(xì)胞的傳代、培養(yǎng)方法

細(xì)胞復(fù)蘇后，在顯微鏡下觀察大約有80%~100%的細(xì)胞已經(jīng)貼壁時用新鮮的培養(yǎng)基換掉原來的培養(yǎng)基，去除DMSO對細(xì)胞的毒害，估計復(fù)蘇到換液的時間為0.5~1.5h。

2~3d細(xì)胞長滿后傳代，傳代前先把培養(yǎng)基和0。2%的胰酶從冷庫放到室溫1~2H，由于冷庫中的培養(yǎng)基溫度與在溫房的溫差很大，這樣做可以防止細(xì)胞"感冒"。

然后把培養(yǎng)瓶中的廢液倒掉，加入約5~10ml胰酶，把培養(yǎng)瓶平放使胰酶能夠浸潤到瓶子的表面，放到瓶架上，把瓶架轉(zhuǎn)速調(diào)到平常運轉(zhuǎn)的倍，大約1MIN后再把胰酶倒掉，一部分很少即可，拍打瓶子，看見細(xì)胞象針眼一樣融融的下滑加入培養(yǎng)基就可以了，如果有部分還難以消化下來，使勁搖晃瓶子也能使其掉下。

加入培養(yǎng)基后搖晃瓶子使細(xì)胞全部懸浮到培養(yǎng)基中，然后把培養(yǎng)基等份分到其他的培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞密度大小決定所傳瓶數(shù)，一般一傳四即可。把瓶架調(diào)到合適的轉(zhuǎn)速，放到溫房繼續(xù)培養(yǎng)，3天后再行傳代，如此反復(fù)進(jìn)行。

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