腫瘤細胞的軟瓊脂集落培養和測定

一、原理

在體外培養基中由一個祖先細胞增殖形成的細胞團，稱之為集落。腫瘤細胞能無限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細胞則不能形成集落。HL一60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養基中形成集落。

二甲基亞砜是一種細胞分化誘導劑，經二甲基亞砜處理后的HL一60細胞按粒系途徑定向成熟分化，同時細胞的增殖力降低，幾乎全部細胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此，這種方法可用于細胞分化的基礎研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。

二、操作

1．收集對數生長期的HL一60細胞，先按實驗十三測定細胞活力，然后調整細胞濃度，制成300～1000活細胞/ml的細胞懸液。

2．取二個培養瓶每個瓶中加9ml調整好濃度的細胞懸液，然后各加入1ml 3％瓊脂(已融化，在65℃水浴中放置)，迅速加入，混勻。

3．用微量加樣器吸140μl二甲基亞砜(MDSO)，加到一個瓶中，充分混勻，為實驗組，另一瓶不加DMSO，為空白對照組。

4．取一個16mm多孔培養板，每孔加1ml(35mm培養皿需加2ml)細胞瓊脂懸液，勿有氣泡，將實驗組和對照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標記。

5．在室溫放置20分鐘使細胞瓊脂懸液凝固。

以上各步驟均在無菌條件下進行。

6．然后移培養板或平皿于CO2培養箱中37℃進行培養。

7．培養7～10天，肉眼觀察并計數細胞集落。

三、結果

以肉眼可見的細胞團(含500個以上細胞)作為計數集落的標準。對照組HL一60細胞在含0.3％的軟瓊脂培養基中生長良好，每個孔中可見有多個集落形成，而實驗組HL一60細胞因經二甲基亞砜誘導分化，細胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少。

四、集落的計數和計算

集落數=n孔中細胞集落數總和/n孔

集落形成率=集落數/接種培養細胞總數×100％

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