小鼠成肌細胞C2C12和人橫紋肌肉瘤A204細胞的消化傳代

1) 細胞消化液的配制及存儲：我采用的是0.25%Trypsin+0.05%EDTA的消化液，BUFFER采用的是D-Hank's液。配完后分裝成4-5ml/tube，于-20度冰箱中儲存。

2) 消化前的處理：當細胞生長至亞融和狀態需要傳代時，提前半小時將配好的消化液放在細胞培養孵箱中預熱，同時將配好的高壓無菌的D-Hank's液也進行預熱。

3) 消化細胞：將預熱的D-Hank's液洗細胞2次，2ml/25cm2，然后再加入預熱的消化液，作用3-5min，并反復振蕩，鏡下觀察。當細胞被消化成單個圓球狀時，加入等體積的培養基中止消化，然后反復吹打，將消化后的細胞懸液，全部吸出后置于離心管中離心，1000rpm，10min。

4) 傳代接種細胞：離心完畢后，棄去上面的上清，加入新鮮預熱的培養基，并計數，按要求接種的密度接種到新的培養瓶中即可。

這種方法的優點是:細胞消化徹底，損傷小，接種均勻，易于控制密度等。

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