高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)及應(yīng)用實(shí)例

一、高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)：

HPLC的出現(xiàn)不過(guò)三十多年的時(shí)間，但這種分離分析技術(shù)的發(fā)展十分迅猛，目前應(yīng)用也十分廣泛。其儀器結(jié)構(gòu)和流程也多種多樣。典型的高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)和流程可用下列方框圖表示。高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置（用雙泵）、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、恒溫器、記錄儀等主要部件。

1 、高壓泵

HPLC使用的色譜柱是很細(xì)的（1～6mm），所用固定相的粒度也非常小（幾μm到幾十μm），所以流動(dòng)相在柱中流動(dòng)受到的阻力很大，在常壓下，流動(dòng)相流速十分緩慢，柱效低且費(fèi)時(shí)。為了達(dá)到快速、高效分離，必須給流動(dòng)相施加很大的壓力，以加快其在柱中的流動(dòng)速度。為此，須用高壓泵進(jìn)行高壓輸液。高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。

HPLC使用的高壓泵應(yīng)滿(mǎn)足下列條件：

a 流量恒定，無(wú)脈動(dòng)，并有較大的調(diào)節(jié)范圍（一般為1～10ml/min）；

b 能抗溶劑腐蝕；

c 有較高的輸液壓力；對(duì)一般分離，60×105Pa的壓力就滿(mǎn)足了，對(duì)高效分離，要求達(dá)到150～300×105Pa。

（1）往復(fù)式柱塞泵

當(dāng)柱塞推入缸體時(shí)，泵頭出口（上部）的單向閥打開(kāi)，同時(shí)，流動(dòng)相進(jìn)入的單向閥（下部）關(guān)閉，這時(shí)就輸出少量的流體。反之，當(dāng)柱塞向外拉時(shí)，流動(dòng)相入口的單向閥打開(kāi)，出口的單向閥同時(shí)關(guān)閉，一定量的流動(dòng)相就由其儲(chǔ)液器吸入缸體中。這種泵的特點(diǎn)是不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相。

（2）氣動(dòng)放大泵

其工作原理是：壓力為p1的低壓氣體推動(dòng)大面積（SA ）活塞A，則在小面積（SB ）活塞B輸出壓力增大至p2的液體。壓力增大的倍數(shù)取決于A(yíng)和B兩活塞的面積比，如果A與B的面積之比為50：1 ，則壓力為5×105Pa的氣體就可得到壓力為250×105Pa的輸出液體。這是一種恒壓泵。

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