紙色譜法

紙色譜法，系以紙為載體，以紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定相，用展開劑進(jìn)行展開的分配色譜。供試品經(jīng)展開后，可用比移值（Rf）表示其各組成成分的位置（比移值＝原點(diǎn)中心至斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)中心至展開劑前沿的距離），但由于影響比移值的因素較多，因而一般采用在相同實(shí)驗條件下與對照物質(zhì)對比以確定其異同。

作為藥品的鑒別時，供試品在色譜中所顯主斑點(diǎn)的顏色（或熒光）與位置，應(yīng)與對照品在色譜中所顯的主斑點(diǎn)相同。作為藥品的純度檢查時，可取一定量的供試品，經(jīng)展開后，按各藥品項下的規(guī)定，檢視其所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)的個數(shù)或呈色（或熒光）的強(qiáng)度。作為藥品的含量測定時，將主色譜斑點(diǎn)剪下洗脫后，再用適宜的方法測定。

1.儀器與材料

(1) 展開室

通常為圓形或長方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃蓋，應(yīng)能密閉。用于下行法時，蓋上有孔，可插入分液漏斗，用以加入展開劑。在近頂端有一用支架架起的玻璃槽作為展開劑的容器，槽內(nèi)有一玻棒，用以壓住色譜濾紙；槽的兩側(cè)各支一玻棒，用以支持色譜濾紙使其自然下垂，避免展開劑沿濾紙與溶劑槽之間發(fā)生虹吸現(xiàn)象。用于上行法時，在蓋上的孔中加塞，塞中插入玻璃懸鉤，以便將點(diǎn)樣后的色譜濾紙掛在鉤上；并除去溶劑槽和支架。

(2)點(diǎn)樣器

常用具支架的微量注射器或定量毛細(xì)管，應(yīng)能使點(diǎn)樣位置正確、集中。

(3) 濾紙

質(zhì)地均勻平整，具有一定機(jī)械強(qiáng)度，不含影響展開效果的雜質(zhì)；也不應(yīng)與所用顯色劑起作用，以致影響分離和鑒別效果，必要時可進(jìn)行處理后再用。用于下行法時，取色譜濾紙按纖維長絲方向切成適當(dāng)大小的紙條，離紙條上端適當(dāng)?shù)木嚯x（使色譜紙上端能足夠浸入溶劑槽內(nèi)的展開劑中，并使點(diǎn)樣基線能在溶劑槽側(cè)的玻璃支持棒下數(shù)厘米處）用鉛筆劃一點(diǎn)樣基線，必要時，可在色譜濾紙下端切成鋸齒形便于展開劑滴下。用于上行法時，色譜濾紙長約25cm，寬度則按需要而定，必要時可將色譜濾紙卷成筒形；點(diǎn)樣基線距底邊約2.5cm。

2.操作方法

(1) 下行法

將供試品溶解于適當(dāng)?shù)娜軇┲兄瞥梢欢舛鹊娜芤骸Ｓ梦⒘课芑蛭⒘孔⑸淦魑∪芤海c(diǎn)于點(diǎn)樣基線上，溶液宜分次點(diǎn)加，每次點(diǎn)加后，俟其自然干燥、低溫烘干或經(jīng)溫?zé)釟饬鞔蹈桑瑯狱c(diǎn)直徑為2～4mm，點(diǎn)間距離約為1.5～2.0cm，樣點(diǎn)通常應(yīng)為圓形。

將點(diǎn)樣后的色譜濾紙上端放在溶劑槽內(nèi)并用玻棒壓住，使色譜紙通過槽側(cè)玻璃支持棒自然下垂，點(diǎn)樣基線在支持棒下數(shù)厘米處。展開前，展開室內(nèi)用各品種項下規(guī)定的溶劑的蒸氣使之飽和，一般可在展開室底部放一裝有規(guī)定溶劑的平皿或?qū)⒔幸?guī)定溶劑的濾紙條附著在展開室內(nèi)壁上，放置一定時間，俟溶劑揮發(fā)使室內(nèi)充滿飽和蒸氣。然后添加展開劑使浸沒溶劑槽內(nèi)的濾紙，展開劑即經(jīng)毛細(xì)管作用沿濾紙移動進(jìn)行展開，展開至規(guī)定的距離后，取出濾紙，標(biāo)明展開劑前沿位置，俟展開劑揮散后按規(guī)定方法檢出色譜斑點(diǎn)。

(2) 上行法

點(diǎn)樣方法同下行法。展開室內(nèi)加入展開劑適量，放置俟展開劑蒸氣飽和后，再下降懸鉤，使色譜濾紙浸入展開劑約0.5cm，展開劑即經(jīng)毛細(xì)管作用沿色譜濾紙上升，除另有規(guī)定外，一般展開至約15cm后，取出晾干，按規(guī)定方法檢視。

展開可以向一個方向進(jìn)行，即單向展開；也可進(jìn)行雙向展開，即先向一個方向展開，取出，俟展開劑完全揮發(fā)后，將濾紙轉(zhuǎn)動90°，再用原展開劑或另一種展開劑進(jìn)行展開；亦可多次展開、連續(xù)展開或徑向展開等。

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