DEAE--52纖維素的處理

關(guān)于DEAE52纖維素的處理只有簡(jiǎn)單的幾步，如下:

1.先將干粉的纖維素浸泡在蒸餾水中，一段時(shí)間大約3小時(shí)左右，我偏愛(ài)這個(gè)時(shí)間，去除雜質(zhì)，最好抽干一下；

2.再用0.5mol/l的HCl溶液浸泡2小時(shí)，用去離子水洗凈至PH中性，并抽干；

3.將抽干的纖維素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小時(shí)，用去離子水洗至中性，抽干。即可用了

對(duì)于用過(guò)的纖維素，可以重復(fù)利用多次，但需要經(jīng)過(guò)再生處理后才可以使用。

再生處理可先用高濃度NaCl (1－2 mol/L)過(guò)柱沖洗柱床，以除去DEAE－52陰離子交換纖維所吸附的成份。

然后，再用0.5 mol/L的HCl和NaOH處理，處理方法與預(yù)處理完全相同。

DEAE－纖維素的處理及裝柱

（1）處理

本實(shí)驗(yàn)采用的是DEAE－纖維素DE 52 是弱酸型陰離子交換劑，

具體處理方法為：先將DE52陰離子交換劑干粉浸泡于蒸餾水中，去除雜質(zhì)；

再在0.5N的HCL溶液中浸泡1－2h,再用無(wú)離子水或蒸餾水洗至pH值中性或PH4以上，并將其在抽濾漏斗中抽干；

將抽干的離子交換劑浸泡在0.5N的NaOH溶液中1－2h，再用無(wú)離子水或蒸餾水將其洗至中性。

（2）裝柱

將層析柱清洗干凈垂直固定到層析架上，加1/3體積的無(wú)離子水，打開(kāi)下出液口，水流暢通，即刻將小燒杯中裝有適宜濃度的柱材，輕輕倒入層析柱中，凝膠自然慢慢沉降再層析柱底部，凝膠沉積直到離層析柱上端1.5－2cm處，停止裝柱。

層析柱上端進(jìn)液口連接恒流泵，下出口連接蛋白質(zhì)監(jiān)測(cè)儀，待層析柱的平衡。

（3）平衡

在柱層析上樣前必須對(duì)層析柱進(jìn)行平衡，所謂平衡就是將層析柱中的溶液用層析過(guò)程的緩沖液（洗脫液）置換出來(lái)，使層析柱中的緩沖系統(tǒng)與柱層析過(guò)程中的系統(tǒng)一致。

其方法是：利用層析柱上端的恒流泵將平衡緩沖液泵入到層析柱內(nèi)，打開(kāi)層析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，當(dāng)下出口流出液的PH值與平衡緩沖液的PH值一致時(shí)，層析柱達(dá)到了平衡。

在本實(shí)驗(yàn)中，用0.002M Tris-HCL緩沖液PH7.4(內(nèi)含0.0001M EDTA)，預(yù)先將DE-52柱進(jìn)行平衡。

DEAE—纖維素的活化

稱取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸餾水浸泡過(guò)夜，觀察溶脹后DEAE的體積。

根據(jù)所需層析柱的柱床體積計(jì)算所需DEAE的用量，稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過(guò)夜，其間換幾次水，每次除去細(xì)小顆粒。

抽干，改用0.5ml/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用無(wú)離子水漂洗，使pH至8左右（用pH試紙檢查）。

再改用0.5ml/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用無(wú)離子水洗至pH6左右。

本實(shí)驗(yàn)中在用前應(yīng)以0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液，浸泡平衡后使用。

DEAE—纖維素的再生

用過(guò)的離子交換劑可以反復(fù)使用，使其恢復(fù)原狀的方法俗稱“再生”。

再生并非每次用酸、堿反復(fù)處理，通常只要“轉(zhuǎn)型”處理即可。

所謂轉(zhuǎn)型就是使交換劑帶上所希望的某種離子，如希望陽(yáng)離子交換劑帶上NH+4則可用NH4OH浸泡，如希望陰離子交換劑帶上Cl—?jiǎng)t用NaCl溶液處理。

本實(shí)驗(yàn)中DEAE—纖維素在酸堿處理后，用0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖溶液浸泡即可轉(zhuǎn)型，以HPO4取代DEAE中的OH—。

一般由于DEAE—纖維素使用后因帶有大量雜蛋白，所以再生時(shí)，先用0.5ml/L NaOH浸洗，用去離子水洗至pH8左右，再轉(zhuǎn)型，即可再使用。

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