牛奶中提取酪蛋白
[目的與要求]
1、了解等電點沉淀法
2、學(xué)習(xí)從牛奶中制備酪蛋白的方法
3、加深對蛋白質(zhì)等電點性質(zhì)的理解
[原理]
蛋白質(zhì)是一種親水膠體，在水溶液中蛋白質(zhì)分子表面形成一個水化層。另外，蛋白質(zhì)又是一種兩性離子，在一定pH溶液能夠維持一個穩(wěn)定的狀態(tài)。
但是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的pH值至等電點時，蛋白質(zhì)會因失去電荷而變得不穩(wěn)定，此時若再加脫水劑或加熱，水化層被破壞，蛋白質(zhì)分子就相互凝聚而析出。等電點沉淀法主要利用兩性電解質(zhì)分子在等電點時溶解度最低的原理，而多種兩性電解質(zhì)具有不同等電點而進(jìn)行分離的一種方法。
牛乳中主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白含量約為35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物，等電點為4.7。將牛乳的pH調(diào)至4.7時，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀，除去脂類雜質(zhì)后便可得到較純的酪蛋白。
但單獨利用等電點沉淀法來分離生化產(chǎn)品效果并不太理想，因為即使在等電點時，有些兩性物質(zhì)仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白質(zhì)在等電點時都能沉淀下來，特別是同一類兩性物質(zhì)的等電點十分接近時。生產(chǎn)中常與有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析法并用，這樣沉淀的效果較好。
本實驗?zāi)康氖鞘箤W(xué)生運(yùn)用等電點沉淀法制備酪蛋白，從中加深對蛋白質(zhì)等電點性質(zhì)的理解。
[方法和步驟]
1、取預(yù)先放冰箱中冷卻的消毒牛奶6mL，3 000r/min離心10min，除去脂肪層的乳液置50毫升燒杯內(nèi)，加熱至40℃左右，在攪拌下慢慢加入10mL左右預(yù)熱的醋酸-醋酸鈉緩沖液，此時混濁液中有大量絮狀物沉下。冷至室溫，3 000r/min離心10min，棄去上清液，得酪蛋白粗品。
2、用 蒸餾 水洗沉淀三次（每次5mL左右），3 000r/min離心10min，棄去上清液。
3、將沉淀置研缽中，研碎后，漸加5mL 95%乙醇，靜置片刻，將全部懸浮液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗抽濾，抽干后的制品，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次（每次5mL），最后用無水乙醚洗沉淀二次（每次5mL），抽干。
4、將沉淀攤開在表面皿上，風(fēng)干，得酪蛋白制品（稱重，記錄）。
5、酪蛋白溶液的配制：稱取酪蛋白0.1g，置10毫升燒杯中，加5mL 0.2mol/L氫氧化鈉溶液，攪勻， 隔水加熱，溶解后轉(zhuǎn)移至10毫升容量瓶中，用少量 蒸餾 水洗 燒杯 數(shù)次，洗液并入 容量瓶 中，最后加水至刻度處，搖勻，置冰箱中保存?zhèn)溆谩?/span>
[結(jié)果與計算]
計算酪蛋白含量和得率：
1、含量：酪蛋白克數(shù)/100mL牛奶
2、 式中理論含量3.5g/100mL牛奶
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