淀粉的提取及性質(zhì)實(shí)驗(yàn)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1.掌握淀粉的提取方法,
2.熟悉淀粉跟碘的反應(yīng)和淀粉水解生成葡萄糖的反應(yīng)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
淀粉主要由直鏈淀粉(約占20%)和支鏈淀粉(約占80%)組成。直鏈淀粉能溶于熱水,跟碘作用顯現(xiàn)藍(lán)色。支鏈淀粉不溶于水,但能在水中脹大而潤(rùn)濕、跟碘作用顯現(xiàn)紫紅色。酸性氯化鈣溶液與磨細(xì)的含淀粉樣品共煮,可使淀粉輕度水解。同時(shí)鈣離子與淀粉分子 上的羥基絡(luò)合,這就使得淀粉分子充分地分散到溶液中,成為淀粉溶液。淀粉在稀酸作用下能發(fā)生水解,生成一系列產(chǎn)物,最后得到葡萄糖。
三、儀器和試劑
儀器
植物 樣品粉碎機(jī)、離心機(jī)、分析天平、粗天平、量筒、三角瓶;分樣篩(100目)、布氏漏斗、抽濾瓶及真空泵、離心管、小電爐;燒杯、三腳架、石棉網(wǎng)、滴管。
試劑
1 .乙醚
2. 80%的乙醇
3. 含有氯化汞的乙醇溶液
4. 醋酸氯化鈣溶液
5. 30%ZnSO4
6. 15%K4Fe(CN)
7. 95%乙醇
8. 淀粉
9. 碘溶液(碘酒或碘化鉀的碘溶液)
10. 稀硫酸(1:5)
11. 碳酸鈉
12. 紅色石蕊試紙
13. 氫氧化鈉溶液(5%)
14. 硫酸銅溶液(2%)
15. 斐林試劑
四、操作步驟
(一)淀粉的提取
1.樣品準(zhǔn)備
(1)稱取樣品:將樣品風(fēng)干、研磨、通過(guò)100目篩,精確稱取約2.5g 樣品細(xì)粉(要求含淀粉約2g,請(qǐng)參考附注估計(jì)),置于離心管內(nèi)。
(2)脫脂:加乙醚數(shù)mL 到離心管內(nèi),用細(xì)玻棒充分?jǐn)嚢瑁缓箅x心。傾出上清液并收集以備回收乙醚。重復(fù)脫脂數(shù)次,以去除大部分油脂、色素等(因油脂的的存在會(huì)使以后淀粉溶液的過(guò)濾困難。大多數(shù)谷物樣品含脂肪較少,可免去這個(gè)脫脂手續(xù)。
(3)抑制酶活性:加含有氯化高汞的乙醇溶液10mL 到離心管內(nèi),充分?jǐn)嚢瑁缓箅x心,傾去上清液,得到殘余物。
(4)脫糖:加80%乙醇10mL 到離心管中,充分?jǐn)嚢枰韵礈鞖堄辔?每次都用同一玻棒),離心,傾去下清液。重復(fù)洗滌數(shù)次以去除可溶性糖分。
2.溶提淀粉
(1)加醋酸-氯化鈣:先用醋酸氯化鈣溶液約10mL 加到離心管中,攪拌后全部?jī)A入250mL 三角瓶?jī)?nèi),再用醋酸氯化鈣溶液50mL 分?jǐn)?shù)次洗滌離心管,洗滌液并入三角瓶?jī)?nèi),攪拌玻棒也轉(zhuǎn)移到三角瓶?jī)?nèi)。
(2)煮沸溶解:先用蠟筆標(biāo)記液面高度,直接置于加有石棉網(wǎng)的小電爐上,在4min~5min 內(nèi)迅速煮沸,保持沸騰15min~17min,立即將三角瓶取下,置流水中冷卻。煮沸過(guò)程中要時(shí)加攪拌,勿令燒焦;要調(diào)節(jié)溫度,勿使泡沫涌出瓶外;常用玻璃將瓶側(cè)的細(xì)粒擦下;并加水保持液面高度。
3.沉淀雜質(zhì)和定容
(1)加沉淀劑:將三角瓶?jī)?nèi)的水解液轉(zhuǎn)入100mL 容量瓶,用醋酸氯化鈣溶液充分洗滌三角瓶瓶,并入容量?jī)?nèi),加30%ZnSO41mL 混合后,再加15%K4Fe(CN)61mL,用水稀釋至接近刻度時(shí),加95%乙醇一滴以破壞泡沫,然后稀釋到刻度,充分混合,靜置,以使蛋白充分沉淀。
(2)濾清:用布氏漏斗(加一層濾紙)吸氣過(guò)濾。先傾清溶液約10mL 于此濾紙上,使其完全濕潤(rùn),
讓溶液流干,棄去濾液,再傾清溶液進(jìn)行過(guò)濾,用干燥的容器接受此濾液,收集約50mL,即可供測(cè)定之用。
(二)淀粉性質(zhì)的測(cè)定
1.淀粉跟碘的反應(yīng): 在一個(gè)試管里加入1mL 制備好的淀粉溶液,然后加如1滴碘液,淀粉溶液立即會(huì)顯深藍(lán)色。加熱,顏色褪去,冷卻,藍(lán)色又出現(xiàn)。
2.淀粉的水解:加 40mL 淀粉溶液于燒杯中,再加稀硫酸 1mL,煮沸5分鐘,取出1mL 熱溶液放在試管里,使其迅速冷卻,滴入1滴碘溶液,出現(xiàn)藍(lán)紫色。以后每隔2min 取一次試樣檢驗(yàn),共計(jì)五次,可以看到不同大小的糊精顆粒對(duì)碘溶液顯現(xiàn)紫紅色、橙紅色、橙黃色及黃色。
3.把已經(jīng)水解的淀粉溶液用碳酸鈉中和硫酸,使溶液略顯堿性。取出1mL,加入盛有斐林試劑的(甲和乙各3mL 的混和液)試管里,搖和均勻,加熱煮沸,即有紅色氧化亞銅沉淀生。
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