細胞增殖生長方面實驗-細胞分裂指數法
原理
細胞分指數是指被測細胞群每1000 個細胞中的分裂細胞數(分裂細胞/1000),用以表示細胞增殖旺盛程度。因此在檢測中需觀察和記錄群體中1000 個細胞中的細胞分裂相數。細胞分裂是細胞增殖的方式,能比較確切地反映細胞增殖度。
細胞分裂在培養的活細胞中也可直接觀察到,因細胞分裂是動態變化過程,故分析細胞分裂指數需用固定標本。
材料與儀器
細胞
蓋片 顯微鏡
步驟
計算細胞分裂指數需用向培養瓶中加蓋片培養法;每日從瓶中抽出蓋片進行固定、染色、制成永久標本,鏡下觀察分裂相并計數。
注意事項
在計算分裂相時,要注意的是
1. 掌握好確定分裂相標準,其中主要是確定好劃分間期和前期、末期和間期等的界限,當兩人以上進行觀察時更須如此,并始終一致,否則會發生人為誤差;
2. 細胞在蓋片上的密度常不均勻,細胞高密區與細胞稀疏區細胞分裂相多少可能不同,觀察時要選擇密度近似區,減少誤差;
3. 待取得逐日分裂相數值后,也可繪成細胞分裂指數曲線。
注意,細胞分裂指數曲線與生長曲線趨勢基本一致,但不完全相同,如當細胞增長達飲飽合密度并進入停止期后,細胞數值很大,而分裂相可完全消失。