酶主要的分離方法
根據酶分子大小和形狀的分離方法
(1)離心分離 許多酶往往富集于某一特定的細胞器內，因此勻漿處理后應先通過離心得到某一特定的亞細胞成分，如細胞核、線粒體、溶酶體等，使酶先富集10-20倍，然后再對某一特定的酶進行純化。一般離心力越大，離心時間就越短。
(2)差速離心和等密度梯度離心分離 對于某一懸浮液，可先選用較低的轉速進行離心，但分辨率較低，僅適用于粗提或濃縮。如果制備的離心介質的密度梯度范圍包括了待分離樣品中所有顆粒的密度，那么經較長時間的離心后，各種顆粒沉降在與其密度相同的位置，這種離心稱為等密度梯度離心。常用的離心介質有氯化鋁、澳化鉀、碘化鈉等，這種方法在核酸研究中應用更為廣泛。
(3)凝膠過濾 分離酶蛋白時，分于大小大于凝膠孔徑的蛋白被凝膠排阻，因而在凝膠顆粒間隙中移動，速度較快；小分子蛋白質則可自由出人凝膠顆粒的小孔內，路徑加長，移動緩慢。這樣通過一定長度的凝膠層析柱后，大小不同的分子蛋白就被分開了。此外，凝膠過濾法還可用于測定未知蛋白的分子量。
(4)透析與超濾 透析在純化過程中極為常用，通過透析可以除去酶液中的鹽類、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。例如細菌蛋白酶經丙烯睛濾膜一次超濾后可濃縮5倍左右，去除雜蛋白50%，去除于物質70%，而酶活性保持75%以上。
根據酶分子電荷性質的分離方法
(1)離于交換層析 根據不同的蛋白質與離于交換劑的親合力不同而達到分離目的的方法稱為離子交換層析。 由于不同的蛋白質分于暴露在外表面的側鏈基團的種類和數量不同，因此在一定PH值和離于強度的緩沖液中，所帶的電荷情況也不相同的。因此在 上樣時應注意加人的蛋白量及樣品體積盡可能小，才能得到較高的分辨率。洗脫時，可以通過改變洗脫劑的離子強度，減弱蛋白質與載體親和力的方法，逐一洗脫各蛋白組分；也可通過改變洗脫劑的PH值，使蛋白質的有效電荷減少而被解吸。
(2)層析聚焦 層析聚焦類似于等電聚焦，但其連續的PH梯度是在固相離于交換載體上形成的。它既具有等電聚焦的高分辨率，又具有柱內容量大的特點，具有較大的應用價值。3)電泳 在外電場作用下，由于蛋白質離于所帶凈電荷的大小和性質不同，因而其泳動方向和速率也不同，從而達到分離的目的。 為減少擴散，整個過程通常是在多孔性的固體載體如淀粉膠上進行的。由于電泳分離的樣品量較小，常作為分析用；但現在已發展了制備電泳，用這種方法制備的酶，可以在介質中洗脫或直接從電泳柱底部依次流出。
(4)等電聚焦電泳 它屬于移動界線電泳法。具體操作方法如下：先從陽極頂端擴散裝人一種酸如磷酸，然后從陰極端擴散裝人一種堿如乙醇胺，這樣便可在兩端間建立起一PH梯度，此種PH梯度可以利用引人兩性電解質混合物而加以穩定。一般是用合成的或是天然的氨基酸當作兩性電解質混合物，而選用的等電點值要涵蓋所需的PH值。電泳時間可能需要數天，用這種方法可以分離和檢出等電點相差僅0.02的兩種蛋白成分。
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