醛糖還原酶測定
問：有關測定醛糖還原酶活性時的反應體系有以下幾個疑問：
1、67mmol/l鈉鉀磷酸鹽緩沖液如何配置？也有人 用50mmol/l的磷酸鉀緩沖液二者哪一種更好。
2、整個反映體系配置須注意哪些問題？最后加DL-甘油醛還是NADPH。
3、NADPH標準曲線繪制分別用多大濃度？請各位指教，謝謝。
答：在測定酶的活性時，有時由于酶的純化不足，導致影響結果，在檢測醛糖還原酶活性時要注意以下幾點：
（一）其它酶和物質的干擾
如組織勻漿中往往含有NADH-細胞色素C還原酶，它將干擾各種還原酶的測定。臨床酶測定中最典型的例子是血液中丙酮酸對丙氨酸氨基轉移酶測定的干擾，由于反應體系中含有大量乳酸脫氫酶和NADH，可與丙酮酸反應消耗NADH，引起340nm處吸光度下降，假如將此NADH下降也算為ALT活性將引起誤差。
其它如紅細胞中腺苷酸激酶（AK）對CK測定的干擾，在CK的酶偶聯體系中ADP是CK底物，但它又同時是AK的底物，二個酶反應都產生ATP，在工具酶（已糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶）作用下都產生NADH引起340nm處吸光度上升，其結果是CK測定結果偏高，為避免此種干擾，所以在反應體系中加入AK的抑制劑AMP和二腺苷酸5′磷酸。
（二）工具酶的污染
目前試劑中所用的試劑酶多從動物組織或細菌中提取，不可避免地會污染有其它酶，如不注意此問題，會引起不正確結果。更有甚者，有些工具酶中就混有測定酶，這種情況下，將產生很高的本底。所以所用的工具酶必須很純，并檢查污染酶的含量，例如測定天冬氨酸氨基轉移酶所用的蘋果酸脫氫酶中所含雜的AST時，按IFCC規定不應超過0.005％。
（三）非酶反應
有些底物不穩定，沒有酶的作用就能自行反應，例如ALP的底物磷酸對硝基酚配成的底物溶液，室溫放置過夜，即自行水解釋放出對硝基成黃色。又如測醛縮酶時，其底物醛類化合物可以和NAD+起非酶反應產生一種具有類似NADH吸收光譜的化合物，給測定帶來困難。
（四）分析容器的污染
如沖洗不當，分析容器和管道中混雜有各種物質，可能影響酶活性，如微量重金屬可使酶失活，殘留的表面活性劑可能抑制酶活性。
（五）沉淀形成
使用光學法監測酶反應時，如有沉淀形成或組織勻漿中顆粒的下沉都會引起吸光度變化，引起測定結果誤差，此情況常見于底物溶解度低而反應體系中底物濃度偏高。可見于用γ-谷氨酰對硝基苯胺為底物測GGT時。
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